ヒト尿道のエンドセリン受容体の検討とエンドセリンの腹圧性尿失禁治療への可能性

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671520
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 森山 信男 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (80143501)
• Keywords: ヒト尿道 / エンドセリン(ET)受容体 / エンドセリン(ET)受容体mRNA / competitive RT-PCR / in situ hybridization

Research Abstract

昨年度は、主としてヒト尿道組織を用いて、エンドセリン受容体についてcompetitive reverse transcriptase polymerase chain reaction(RT-PCR)を行なった。本年度(平成13年度)は各サブタイプのin situ hybridization probeを作製し、ヒト尿道筋組織における局在の差を検討した。
【方法】:Asbergらの方法(Scand J Clin Lab Invest 58 : 299-306, 1998)に準じてendothelin A(ET_A)とendothein B(ET_B)受容体サブタイプのmRNA並びにpreproendothelin-1(ET-1)mRNAのprimerとcompetitior を作成し、膀胱尿道全摘男女症例(膀胱腫瘍)の尿道標本に対して、competitive reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR)をおこなった。尿道標本は尿道を近位尿道から遠位尿道まで3-4分割し、各部位におけるエンドセリン受容体の半定量を行い、その差異を検討した。作成したprimerは下記の通りである。
sense antisense PCR products
ET_A : ctctgcgctcttagtgttga acgctgcttaagatgttc 378bp
ET_B : aatggacagcagtagaaattg gaccaggcaaagacggttttgg 333bp
preproET-1 : tctacttctgccacctggacat ctcggttgtgggtcacataa 446bp
またcompetitorはTAKARA Competitive DNA constructin kitを使用し、ET_A, ET_B, preproET-1に対してそれぞれ288bp, 244bp, 342bpのcompetitorを作成した。
なおin situ hybridization probeも上記のantisenseをAlexa Fluor 488でラベルし、型のごとく45℃で14時間hybridizationを行い共焦点レーザー顕微鏡にて局在を検討した。
【結果】:各部位ともETA, ETB, preproET-1の割合はほぼ一定で3×10^5〜10^6 competitor量(copy)であった。in situ hybridizationでは尿道の平滑筋全層にET_A, ET_B, preproET-1が認められ、サブタイプによる局在は見られなかった。
【結語】:ヒト尿道各部位のエンドセリン受容体のサブタイプ(ET_AとET_B)並びにpreproET-1の量はいずれもほぼ同量であり、かつ、部位による差異は見られなかった。即ち、全尿道におけるエンドセリン受容体のサブタイプはAとBともほぼ同じ部位にほぼ同量存在すると思われる。

Research Products

• [Publications] Suzuki. Y., Moriyama N., et al.: "Distribution of α_<1L>-adrenoceptor in canine prostate : characterization by quantitative autoradiography}"J. Pharm. Pharmacol.. 52. 653-657 (2000)
• [Publications] Ahmed, H., Moriyama, N., et al.: "Contractile properties of urethral smooth muscles of young and aged female dogs -morphological and pharmacological aspects-"Int. J. Urol.. 7. 298-306 (2000)
• [Publications] Shindo, T., Kuriharal, H., Kuno, K., Yokoyama, H., Wada, T., Kurihara, Y., Imai, T., Wang, Y., Ogata, M., Nishimatsu, H., Moriyama, N., et al.: "ADAMTS-1 : a metalloproteinase-disintegrin essential for normal growth, fertility, and organ morphology and function"J. Clin. Invest.. 105. 1345-1352 (2000)
• [Publications] Nishimatsu, H., Suzuki, E., Nagata, D., Moriyamam N., et al.: "Adrenomedullin Induces Endothelium-Dependent Vasorelaxation via the Phosphatidylinositol 3-Kinase/Akt-Dependent Pathway in Rat Aorta"Circ. Res.. 89. 63-70 (2001)
• [Publications] Usui, T., Hara, M., Satoh, H., Moriyama, H., et al.: "Molecular basis of ocular abnormalities associated with proximal renal tubular acidosis"J. Clin. Invest.. 108. 107-115 (2001)
• [Publications] Shindo, T., Kurihara, Y., Nishimatsu, H., Moriyam, N., et al.: "Vascular abnormalities and elevated blood pressure in mice lacking adrenomeduflin gene"Circulation. 104. 1964-1971 (2001)
• [Publications] 森山信男: "定量的オートラジオグラフィーin神経泌尿器科学研究法 これから研究を志す人のために((高橋公太監修、武田正之編集)"日本医学館. 87-95/172 (2000)