マウス子宮内膜上皮細胞・間質細胞への局所的遺伝子導入法の開発

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671591
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 箕浦 博之 三重大学, 医学部・附属病院, 講師 (70242964)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 豊田 長康 三重大学, 医学部, 教授 (40126983)
• Keywords: 着床 / 遺伝子導入

Research Abstract

妊娠初期のマウス子宮内膜上皮細胞・間質細胞へのplasmid DNA導入のための基礎条件の設定
cytomegarovirus promotorの下流域にgalactosidaseをreporter geneとして持つpcDNA3を指摘条件設定に用いた。また、controlとしてreporter geneを除いたplasmidを用いる。Liposome担体としてはlipofectoAMINEあるいはDOTAP,F127 pluronic gel混合物を用いる。種々の濃度(1〜30μg/μl)のplasmid DNAを含むLiposomeを、妊娠第0.5日目〜妊娠2.5日目のICR系雌マウスの子宮腔内・内膜内(間膜側あるいは非間膜側)に注入する。その際、一側の子宮角にはreporter geneを持つplasmidを含むLiposomeを、反対側の子宮角にはreporter geneを持たないplasmidを含むLiposomeを注入した。子宮内腔への投与は、子宮内膜上皮細胞への取り込みを期待したものであり、また子宮内膜内への注入は間質細胞への取り込みを期待したものである。Plasmid DNAが細胞内に導入されるとgalactosidaseが発現するので、その活性をX-galを発色器質として組織学的に検出することができる。妊娠第2.5日目に腔内投与をした際、子宮腺管上皮細胞への取り込みが確認された。肝臓には取り込みは確認されなかった。内膜内へのLiposomeの投与による間質細胞への取り込みに関しては残念ながら安定した取り込みができず、投与経路の検討を試みた。妊娠初期に尾静脈から全身投与し、着床部位における血管透過性亢進からある程度選択的に取り込みが起こることを期待した。着床部位周辺へのプラスミドDNAの取り込みが認められた。

Research Products

• [Publications] Minaura, H et.al.: "Identification of genes up-or down-regulated by embryo in move vreius during pcri-implantation pored"Journal of Fertilization and Implantation. 19(1). 17-20 (2002)
• [Publications] Tanaka, K et.al.: "The expression of Ghrelin during decidualization of human endometrial stromol cells"Journal of Fertilization and Implantation. 19(1). 15-16 (2002)
• [Publications] Isobe T et.al.: "The effect of RANTES on the human spermatozoa molitily"Human ceproduction. (In press).