神経芽細胞腫の進展および退縮分化機序とテロメア,テロメラーゼ

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671739
• Research Institution: HIROSHIMA UNIVERSITY
• Principal Investigator: 山岡 裕明 広島大学, 医学部・附属病院, 助手 (90311810)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 横山 隆 広島大学, 医学部・附属病院, 教授 (60034104) ; 桧山 英三 広島大学, 医学部・附属病院, 助教授 (00218744)
• Keywords: 神経芽細胞腫 / テロメラーゼ / テロメア長 / アポトーシス / hTRF1 / HTRF2 / FISH / TUNNEL法

Research Abstract

神経芽細胞腫凍結検体約200検体からRNA,蛋白を抽出し、既存の電気泳動装置を用いてノザンハイブリダイゼーション,蛍光サーマルサイクラーを用いたRT-PCR等にてテロメア結合蛋白hTRF1,hTRF2の発現を検討したところ,hTRF1発現量はテロメア長と正の相関を認めた.さらに、最近クローニングされたテロメア結合蛋白であるTankylase, TIN2, hRap1について検討したが、有意な相関は得られなかった。FISH法にてテロメアを染色し、購入した冷却CCDカメラと解析装置で行うと,サザン法にてテロメア長の長かった腫瘍のシグナルは強く,hTRF1,hTRF2の局在とほぼ一致した。神経芽腫の細胞株5株で検討した結果、5株ともテロメラーゼ活性は高く、これらのうち4株はテロメア長が短縮し、テロメア結合蛋白の中でhTRF1発現がテロメア長と相関した。これらの細胞を、抗hTRF1抗体,抗hTRF2抗体で処理したところ、細胞増殖能は変化がなく、テロメア長は延長した細胞株が3株存在し、テロメラーゼ活性には変化がなかった。また、TUNNEL法とDNA断片化からアポトーシスの誘導を検索したが、有意なアポトーシスの誘導効果は得られなかった。そこで、テロメラーゼの必須部分であるhTRを切断するリボザイムを投与すると、5株中2株にテロメラーゼ活性が抑制され、細胞死がみられた。TUNNEL法とDNA断片化から,腫瘍のアポトーシスを検討すると,アポトーシスに向かう腫瘍細胞の混在が確認された。
以上から,テロメラーゼの活性の抑制により、神経芽腫はアポトーシスへ向かうシグナルが働いていることが示唆された。

Research Products

• [Publications] Hiyama E., et al.: "Clinical utility of telomerase in cancer"Oncogene. 21・1. 643-640 (2002)
• [Publications] 檜山英三, 他: "マイクロアレイ法によるサイトカインプロフィール解析"侵襲と免疫. (in press). (2002)
• [Publications] 檜山英三, 他: "ショック時におけるサイトカインプロフィール解析のためのマイクロアレイ法の導入とその意義"ショック. 10・8. 677-685 (2002)
• [Publications] Ikeda H., et al.: "Expenence with International Neuroblastoma Staging System and Pathology Classification"British Journal of Cancer. (in press). (2002)
• [Publications] Hiyama E., et al.: "Immunohistocheical detection of telomerase (hTERT)in human cancer tissues and a subset of cells in normal tissues"Neoplasia. 3・1. 17-26 (2001)
• [Publications] Shay, J.W.et al.: "Telomerase and cancer"Human Molecular Genetics. 10・8. 677-685 (2001)
• [Publications] 山岡裕明, 他: "肺転移を有する肝芽腫に対する治療戦略"日本外科系連合学会誌. 26・5. 1317-1323 (2001)
• [Publications] 檜山英三, 他: "小児固形悪性腫瘍のテロメラーゼ活性とその意義"広島医学. 54・8. 692-697 (2001)
• [Publications] Hiyama E., et al.: "Biological characteristics of neuroblastoma with partial deletion in the short arm of chromosome 1"Medical and Pediaetric Oncology. 36・1. 67-71 (2001)
• [Publications] Mendoza C., et al.: "Allelotype and loss of heterozygosity around the L-myc gene locus in primary lung cancers"Lung cancer. 28・1. 117-125 (2001)
• [Publications] Hiyama K. et al.: "Lung Cancer (Methods in Molecular Medicine series)"Detection of telomerase activity in lung cancer tissues (in press). (2002)
• [Publications] Hiyama K. et al.: "Non-RI protocols for L-myc allelotyping and deletion mapping of chromosome 1p in primary lung canccrs"Humana Press (in press). (2002)