ヒト軟骨由来多機能成長因子エコジェニン/CTGFの細胞内機能の探究

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12671807
• Research Institution: OKAYAMA UNIVERSITY
• Principal Investigator: 久保田 聡 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助手 (90221936)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 中西 徹 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 助教授 (30243463) ; 滝川 正春 岡山大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (20112063)
• Keywords: CTGF / 軟骨細胞 / 細胞周期 / M期 / チェックポイント

Research Abstract

1)細胞内CTGF過剰発現による細胞周期変調効果の検証-前年度我々は、,サル腎由来線維芽細胞株Cos-7にCTGFを高レベルで発現させると、それは細胞核近傍の特定のスポットに集中し細胞周期をG2-M期で停止、遅延させる効果を持つことを見い出した。これに続いて本年度は、マウス成長板軟骨細胞内CTGFを免疫組織学的に詳細解析した。その結果CTGFは、増殖を停止した肥大軟骨細胞においても同様のスポットに集積していることがわかった。またヒト扁平上皮癌由来HSC-3細胞株にCTGF発現ベクターを導入し、安定発現クローンを樹立した。現在最も強くCTGFを発現するクローンの遺伝子発現パターンをマクロアレイで解析中であるが、細胞増殖にかかわる特定の遺伝子の発現抑制が起こっていることが明らかになりつつあり興味深い。
2)CTGFモジュール構造と、細胞周期コントロール機能の構造-機能連関-昨年度構築した様々なCTGF欠損変異体発現プラスミドを利用し、Cos-7を用いてそれらの細胞内局在および細胞周期変調効果の検証を続けている。本年度の解析では、4つのモジュールのうち細胞周期変調には最N末のIGFBPモジュールは必要ではなく、また細胞核近傍への局在にはそれに続くVWCモジュールが重要な役割を担っていることが分かってきた。加えて各モジュールタンパク質の単独生産にも成功し、今後応用が期待されている。
3)CTGFの細胞内作用点、レセプターの探索-本年度までに我々はCTGF分子を固定したアフィニティーカラムを用い、CTGFが細胞内で結合するタンパク質を細胞質抽出液から精製、部分アミノ酸配列を決定し、それが細胞骨格タンパク質であることを突き止めた。現在その結合特異性の確認や機能的意義の検討を行っている。

Research Products

• [Publications] Satoshi Kubota et al.: "Novel mode of processing and secretion of connective tissue growth factor/ecogenin (CTGF/Hcs24) in chondrocytic HCS-2/8 cells"Bone. 29. 155-161 (2001)
• [Publications] Gen Yosimiehi et al.: "CTGF/Hcs24 induces chondrocyte differentiation through p44/42 MAPK/extracellular-signal regulated kinase (ERK)"European Jounal of Biochemistry. 268. 1-9 (2001)
• [Publications] Tohru Nakanishi et al.: "Overexpression of connective tissue growth factor/hypertrophic chondrocyte-specific gene product 24 decreases bone density in adult mice and induces dwarfism"Biochemical and Biophysical Research Coommunucations. 281. 678-681 (2001)
• [Publications] Seiji Kondo et al.: "Connective tissue growth factor increased by hypoxia may initiate angiogenesis in collaboration with matrix metalloproteinases"Carcinogenesis. (印刷中). (2002)