2000 Fiscal Year Annual Research Report
ヒト単球中の高比重リポ蛋白(HDL)結合蛋白の機能および構造の解明と測定法の開発
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12672241
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| Research Institution | Shinshu University |
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Principal Investigator |
勝山 努 信州大学, 医学部, 教授 (90020809)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
太田 浩良 信州大学, 医学部, 助手 (50273107)
中山 淳 信州大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (10221459)
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| Keywords | 高比重リポ蛋白 / フローサイトメトリー / 単球 / アポHDL / アフィニティカラムクロマトグラフィー / HDL結合蛋白 |
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| Research Abstract |
本年度、我々はFACScan-フローサイトメトリー装置(Becton Dickinson社)を用いてフルオロイソチオシアネート(FITC)標識高比重リポ蛋白3(HDL3)をリガンドとしたヒト末梢血単球中のHDL結合蛋白の結合活性の測定系の開発と、ヒト単核球分画からHDL結合蛋白の精製を試みた。さらに、HDL結合蛋白のリガンドとして超遠心分離法およびDEAE-イオン交換により調製したpre β HDLおよび脱脂して得たアポHDLの結合性について検討した。フローサイトメトリーを用いた測定系において、ヒト単球の細胞膜表面をトリプシンにより処理をおこなったところHDLとの結合活性は減少したことからHDL結合部位はヒト単球の細胞膜表面にHDL結合蛋白が存在すると示唆された。リガンドとしてHDL粒子だけでなくアポHDLとも特異的に結合したことからHDL結合部位はHDLの脂質ではなく蛋白を認識していることが見い出された。また、ヒト単球はHDLの亜分画であるpre β HDL(脂質含量が少なく、細胞からコレステロールの引き抜きに関与すると報告されている)とも親和性を有することを認めた。比重法によりヒト末梢血から単核球分画を調製し、界面活性剤により単球膜を可溶化した後、DEAE-イオン交換、レクチンアフィニティおよびHDLアフィニティカラムクロマトグラフィーによりHDL結合蛋白の精製を行った。さらに、逆相高速液体クロマトグラフィ(RP-HPLC)により純度の高い蛋白を得た。調製した精製蛋白を抗原としてマウスに免疫し、特異抗体を作製中である。
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[Publications] Yamauchi K: "Effect of apolipoprotein AII on the interaction of apolipoprotein E with beta-amyloid : some apo (E-AII) complexes inhibit the internalization of beta-amyloid in cultures of neuroblastoma cells."J Neurosci Res. 62-4. 608-614 (2000)
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[Publications] Sugano M: "Analysis of hemoglobin and globin chain variants by a commonly used capillary isoelectric focusing method."Electrophoresis.. 21. 3016-3019 (2000)
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[Publications] Okumura N: "Difference in electrophoretic mobility and plasmic digestion profile between four recombinant fibrinogens, gamma 308K, gamma 308I, gamma 308A, and wild type."Electrophoresis. 21-12. 2309-2315 (2000)
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[Publications] Jun Nakayama: "Recent Progress in Paradoxical Concanavalin A Staining Acta Histochem."Cytochem.. 33. 153-157 (2000)
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[Publications] Hi daka E: "Coexistence of gland mucous cell-type mucin and lysozyme in gastric gland mucous cells"Histochem Cell Biol. 113. 91-98 (2000)
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[Publications] Terasawa F: "Identification of a dysfibrinogen, the substitution of gamma308Asn (AAT) to Lys (AAG), using coagulation tests, immunoblot analysis, and allele-specific polymerase chain reaction."Clin Chim Acta. 295. 77-85 (2000)
