2001 Fiscal Year Annual Research Report
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12680604
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
高崎 誠一 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (80112093)
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| Keywords | 精子 / 糖鎖認識分子 / 接着 |
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| Research Abstract |
卵との結合や輸卵管上皮細胞との接着に関与するブタ精子側の糖鎖認識分子の解析を進め、以下の結果を得た。
デキストラン骨格の多価糖鎖プローブをプラスチックプレートに固相化し、組織の界面活性化剤による可溶化物をプレートに添加し、結合したタンパク質をプレート内でビオチン化後、電気泳動で解析するという簡便かつ高感度な糖鎖認識分子検出法を開発した。この方法を導入し、ブタ精子に存在する糖鎖認識分子の特定を試みたところ、単離したブタ精子細胞膜のTriton可溶化物の遠心上清中に、N-アセチルラクトサミン構造やLewis x構造を有するプローブを固相化したウェルに対して特異的に結合するバンドを検出することができた。これらの結合は対応するオリゴ糖によって特異的に阻害されたことから、N-アセチルラクトサミン構造を認識する分子およびLewis x構造を認識する分子が確実に存在することが判明した。
そこで、精子細胞膜画分を中性の界面活性剤で可溶化し、N-アセチルラクトサミン構造を有する糖タンパク質を結合させたビーズによる親和性カラムクロマトグラフィーを行い、約70kDaの分子量を持つタンパク質を検出した。この分子を2次元電気泳動法で精製し、N末端アミノ酸配列、およびプロテアーゼ消化によって得たペプチドの部分アミノ酸配列を決定した。更にこの配列情報をもとに遺伝子のクローニングを行い、塩基配列を決定した。この知見は、今後の分子レベルでの解析の基礎となるものである。
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Research Products
(4 results)
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[Publications] Seiichiro Takahashi: "A new β-1, 2-N-acetylglucosaminyltransferase that may play a role in the biosynthesis of mammalian O-mannosyl glycans"Glycobiology. 11・1. 37-45 (2001)
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[Publications] Naoei Yoshitani: "Detection of carbohydrate recognition molecules on the plasma membrane of boar sperm by dextran-based multivalent oligosaccharide probes"Glycobiology. 11・4. 313-320 (2001)
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[Publications] Norihiro Kotani: "Knockout of mouse β1, 4-galactosyltransferase-1 gene results in a dramatic shift of outer chain moieties of N-glycans from type 2 to type 1 chains in hepatic membrane and plasma glycoproteins"Biochemical Journal. 357・3. 827-834 (2001)
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[Publications] Masashi Takagawa: "O-glycosylation of G-protein coupled receptor, octopus rhodopsin. Direct analysis by FAB mass spectrometry"FEBS Letters. 496. 19-24 (2001)
