2001 Fiscal Year Annual Research Report
リコビナントgp130を用いたニワトリIL6とLIFのクローニング
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12760228
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| Research Institution | Hiroshima University |
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Principal Investigator |
堀内 浩幸 広島大学, 生物生産学部, 助手 (80243608)
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| Keywords | ニワトリ / gp130 / IL-6 / LIF / 抗体 |
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| Research Abstract |
本研究では,ニワトリgp130の塩基配列をもとに,リコビナントgp130を作成し,このリコンビナントgp130に対する抗体を作製,利用することにより,gp130のリガンドであるニワトリIL-6とLIFをクローニングすることにある.本年度は昨年度,作製に成功した抗gp130抗体を用いた免疫沈降法とIL-6およびLIFのクローニングを試み,以下の成果を得た.
1.作出した抗gp130抗体を用いて免疫沈降法をおこない,リコビナントgp130を特異的に単離できることを確認した.
2.ニワトリ由来細胞を用いて1.と同様に免疫沈降をおこない,天然型のgp130を沈降させたが同時に多数のタンパクが沈降することがわかった.
3.本研究過程で世界で初めてニワトリLIFのクローニングに成功した.
4.同時に,これまでニワトリでは未解析であった血小板由来増殖因子のクローニングにも成功した.
5.IL-6の断片クローニングに成功したが,ドイツのグループが先に全長を報告してしまった.
6.クローニングしたLIFおよびIL-6のリコンビナント体を作製し,ニワトリ細胞に対して生物活性を持つことを明らかにした.
現在,当初の目的通り,これらのリコンビナント体の有効活用系の構築を目指している.
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[Publications] N.Nakamura: "Construction of recombinant monoclonal antibodies from a chicken hybridoma line secreting specific antibody"Cytotechnology. 32. 191-198 (2000)
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[Publications] H.Horiuchi: "cDNA cloning and mRNA expression of PDGF in chicken thrombocytes"Proceedings of the International Veterinary Cytokine and Vaccine conference. 1. 234-237 (2000)
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[Publications] T.Inoue: "Expression of chicken gp130 mRNA in various organs and cells"Proceedings of the International Veterinary Cytokine and Vaccine Conference. 1. 330-333 (2000)
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[Publications] H.Horiuchi: "Establishment of monoclonal antibodies against chicken gp130"International Veterinary Immunology. 6. 106 (2001)
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[Publications] H.Horiuchi: "Characterization and expression of three forms of cDNA encoding chicken Platelet-derived growth factor-A chain"GENE. 272. 181-190 (2001)
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[Publications] H.Horiuchi: "Cloning and characterization of a chicken platelet-derived growth Factor B-chain cDNA"Developmental and Comparative Immunology. 26. 73-83 (2002)
