大腸菌O157における志賀毒素産生に関与する遺伝子の機能解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12770145
• Research Institution: Kinki University
• Principal Investigator: 宮本 裕史 近畿大学, 生物理工学部, 講師 (20271413)
• Keywords: O157 / ベロ毒素 / プロモーター

Research Abstract

腸管出血性大腸菌O157感染症は、一頃のように大流行を見せることはなくなってきた。しかしながら、先進国において散発的に感染者が観察されており、その効果的な治療法の確立が待望されている。O157感染では溶血性尿毒症などの重篤な症状が小児において著しく、治療は困難をきわめている。溶血性尿毒症の原因はO157が産するベロ毒素が原因となっていると考えられており、その遺伝子はO157に溶原化するラムダ様ファージゲノム中に存在している。ベロ毒素遺伝子は2種類に大きく分類され、stx1,stx2と表記される。この二つの遺伝子のどちらを有するかにより、溶原ファージの種類が分けられ、それぞれVT1ファージ、VT2ファージと呼ばれる。
先に私たちの研究グループではO157に内在するVT2ファージの全ゲノム構造を明らかにし、それが、基本的にラムダと同一であることを示した。本研究ではstx2遺伝子の発現機構を明らかにするために、stx2の上流にあるpR'プロモーターの同定を行った。方法としてはpR'プロモーターと思われる領域の下流にルシフェラーゼ遺伝子を連結したプラスミドを大腸菌BL21株に導入し、ルシフェラーゼの酵素活性を指標として、pR'プロモーターの絞り込みを行った。その結果、Q遺伝子の3'端180塩基では非常に高いルシフェラーゼ活性を確認することができたが、Q遺伝子の3'端180塩基にそのさらに下流320塩基を加えた配列をルシフェラーゼ遺伝子の上流につないだ場合には活性が低下した。このことはQ遺伝子の3'端180塩基にプロモーターが存在し、その下流320塩基にはターミネーターが存在することを意味する。

Research Products

• [Publications] Yamada, N: "Cloning and expression of the mouse Pse gene encoding a novel Ets family member"Gene. 241. 267-274 (2000)
• [Publications] Miyamoto, H: "Sequence of a cDNA encoding a novel basic protein expressed in rabbit placenta"Jpn. J. Fertil. Steril. 45. 37-39 (2000)
• [Publications] Miyashita, T: "Complementary DNA cloning and characterization of Pearlin, a new class of matrix protein in the nacreous layer of oyster pearls"Marine Biotechnol. 2. 512-521 (2000)
• [Publications] Miyashita, T: "Identical carbonic anhydrase contributes to nacreous or prismatic layer Formation in Pinctada fucata"The Veliger. (2002)
• [Publications] Miyamoto, H: "Analysis of genes expressed in the mantle of oyster Crassostrea gigas"Fisheries Sci. (2002)