パラインフルエンザ2型ウイルスケツム操作によるウイルス学的展開

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12770153
• Research Institution: Mie University
• Principal Investigator: 河野 光雄 三重大学, 医学部, 講師 (00234097)
• Keywords: rPIV2 / rPIV2V(-) / ウイルスベクター / リバースジェネティクス / ワクチン

Research Abstract

リバースジェネティクスの手法を駆使して、(-)極性の非分節1本鎖RNA[3′(leader)-NP-V/P-M-F-HN-L-(trailer)-5′]をゲノムとしてもっているパラインフルエンザ2型ウイルス(PIV2)の全長cDNAから、ワクシニアウイルスT7発現系(MVA-T7)を用いてリコンビナントPIV2(rPIV2)を作製した。さらにこのrPIV2のV遺伝子に変異(stop codonの導入)を加え、V蛋白のカルボキシ末端約60アミノ酸を欠損させたウイルス[rPIV2(V-)]を作製した。これらのウイルスがcDNA由来のリコンビナントウイルスであることを、RT-PCRによるGenetic tagの確認及びウエスタンブロット法を用いたDefective V蛋白の確認により同定し、さらにその性状を比較した。
rPIV2はインターフェロン(IFN)に抵抗性を示すが、一方rPIV2V(-)はIFNに対して高い感受性を示しVero細胞(IFN産生能がない)以外の細胞ではほとんど増殖できなかった。また、Vero細胞を用いての感染実験において、感染細胞内でのウイルスmRNA及び蛋白合成量において、両者間でほとんど差は見られないが、その培養上清中にリリースされたウイルス粒子の数はrPIV2V(-)はrPIV2よりも100〜200倍減少しており、rPIV2V(-)はVirus assembly能が完全ではないことが示唆された。これらの結果からPIV2のV蛋白のV特異的な領域がIFNに対する抵抗性とウイルス粒子のassemblyに関与していることが示唆された。

Research Products

• [Publications] Miyamoto et al.: "Induction of c-Src in human blood monocytes by anti-CD98/FRP-1 mAb in an Sp1-dependent fashion."Cell Immunol.. 204(2). 105-113 (2000)
• [Publications] Miyamoto et al.: "Spindle-shaped cells derived from giant-cell tumor of bone support differentiation of blood monocytes to osteoclast-like cells."J Orthop Res.. 18(4). 647-654 (2000)
• [Publications] Komada et al.: "N-glycosylation contributes to the limited cross-reactivity between hemagglutininn euraminidase proteins of human parainfluenza virus type 4A and 4B."Med Microbiol Immunol.. 189(1). 1-6 (2000)
• [Publications] Komada et al.: "Incomplete replication of human parainfluenza virus type 4 in LLC-MK2 cells and in L929 cells."Med Microbiol Immunol.. 188(4). 185-189 (2000)