インターフェロンによるC型肝炎ウイルス蛋白翻訳抑制機構の解明

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12770254
• Research Institution: Kanazawa University
• Principal Investigator: 本多 政夫 金沢大学, 医学部・附属病院, 助手 (00272980)
• Keywords: C型肝炎ウイルス / Internal ribosomal entry site / インターフェロン

Research Abstract

我々は、先にサイトメガロウイルスプロモーターの下流にRenilla luciferase(R-luci),HCVの5′NTR,Firefly luciferase(F-luci)の順で遺伝子を組み込んだベクターを作成し、この遺伝子を恒常的に発現しているHuh-7由来細胞を樹立した。この樹立細胞では、R-luciは通常の真核生物の蛋白翻訳機構であるキャップ依存性に、F-luciはHCVの5′NTRによりIRES依存性に翻訳される。この樹立細胞を用いた検討でHCVの蛋白翻訳効率は細胞分裂期で高いことを見いだしている(Gastroenterology 118,152-162,2000)。今回、インターフェロン及び二本鎖RNA(Poly I:Poly C)処理によりIRES依存性蛋白翻訳が特異的に抑制されることを見いだした(Prepared for submission)。この作用メカニズムを解明するため、インターフェロンによる、2-5AS(oligoadenylate synthetase)活性の誘導、PKR(2本鎖RNA依存性プロテインキナーゼ)の活性化、及びHCV-IRESを活性化させる宿主蛋白であるLa protein、及びPyrimidine tract binding protein(PTB)の発現を検討した。インターフェロンの投与により2-5ASは著名に上昇したが、Poly I:Poly C投与では活性の上昇は顕著でなかった。PKRの発現はインターフェロン、Poly I:Poly C投与で上昇したが、トランスフェクションによるPKR発現過剰状態ではIRES活性の特異的抑制は見られなかった。一方、IRES活性化因子のLa proteinはインターフェロン、Poly I:Poly C投与で発現が著名に抑制され、PTB及びコントロールとして用いたアルブミンの発現には変化が認められなかった。以上より、インターフェロン、Poly I:Poly Cによる特異的IRES活性抑制はLa proteinの発現抑制(恐らくは早期アポトーシスによる)によることが推察さ、インターフェロンの新しい抗ウイルス効果の存在が示唆された。

Research Products

• [Publications] Masao Honda: "Differential Gene Expression Between Chronic Hepatitis B and C Hepatic Lesion."Gastroenterology. 120. 955-966 (2001)
• [Publications] Masao Honda: "Hepatitis C virus core protein induces apoptosis and impairs cell-cycle regulation in stably transformed Chinese hamster overy cells."Hepatology. 31. 1351-1359 (2000)
• [Publications] Masao Honda: "Cell Cycle Regulation of Hepatitis C Virus IRES-Directed Translation"Gastroenterology. 118. 152-162 (2000)
• [Publications] Masao Honda: "A phylogenetically conserved stem-loop structure at the 5′border of the internal ribosome entry site of hepatitis C virus is required for cap-independent viral translation"Journal of Virology. 73. 1165-1174 (1999)
• [Publications] Masao Honda: "Natural variation in translational activities of the 5′nontranslated RNAs of hepatitis C virus genotypes 1a and 1b : evidence for a long-range RNA-RNA interaction outside of the internal ribosomal entry site"Journal of Virology. 73. 4941-4951 (1999)