2000 Fiscal Year Annual Research Report
心肥大における転写調節因子cMG1/ERF-1遺伝子発現動態の解析
Project/Area Number |
12770357
|
Research Institution | Keio University |
Principal Investigator |
家田 真樹 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (70296557)
|
Keywords | 心肥大 / Leukemia Inhibitory Factor / ラット / cMG1 / ERF-1 / 細胞内情報伝達系 / 培養心筋細胞 |
Research Abstract |
本研究ではcMG1/ERF-1遺伝子の心肥大現象における役割を解明するため、1)Leukemia Inhibitory Factor(LIF)刺激後の本遺伝子の発現の時間経過、2)本遺伝子がいかなるシグナル伝達経路を介し発現するか、3)他の心肥大惹起因子による本遺伝子の発現の変化、4)機械的伸展刺激により誘導されるか否か、5)生体心において急性圧負荷刺激により誘導されるか否か、6)細胞内の局在等を明らかにすることを目的とした。 ラット新生児培養心筋細胞をLIFで刺激した際に、cMG1/ERF-1遺伝子の発現が30分後にピークとなることを確認した。 LIF以外に心肥大惹起因子として、angiotensin II、phenylephrine、endothelin-1を用いてラット新生児培養心筋細胞を刺激すると、ピークとなる時間は異なるもののcMG1/ERF-1遺伝子が誘導されることをノザンブロットで示した。 cMG1/ERF-1遺伝子発現増強がどのような細胞内情報伝達系を介しているかを検討するために、LIF刺激前にAG490(JAK2阻害薬)、PD98059(MEK阻害薬)、wortmannin(PI3-K阻害薬),genistein(チロシンキナーゼ阻害薬)を前投与することにより、この遺伝子発現が抑制されるかを解析した。LIF刺激によるcMG1/ERF-1遺伝子の発現増強はAG490で完全に抑制され、genisteinで部分的に抑制された。一方PD98059やwortmanninではほとんど抑制されなかった。これら結果から本遺伝子の発現はJAK/STAT系を介していると考えられた。 cMG1/ERF-1のGST融合蛋白を大腸菌に発現させた。そしてマウスおよびウサギに免疫し、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体を現在作製している途中である。
|