2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12770557
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
高橋 宗春 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (30313125)
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| Keywords | 造血幹細胞 / 体外増幅 / アデノウイルス / Notch / AGM |
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| Research Abstract |
造血幹細胞へシグナル伝達分子の遺伝子を導入・発現させて増幅を図る新しい方法の確立のため、本年度は導入するシグナル伝達物質の選択とそのシグナル伝達機構の主に血球分化抑制能からみた解析などを行った。
1)導入するシグナル伝達物質の選択
研究の目的に最適なシグナル伝達分子を選択するためのin vitroにおけるスクリーニング系として、1)ES細胞からの造血細胞の誘導、2)AGM領域由来の細胞からの造血細胞の誘導、の2系を確立した。これらを用いて様々なシグナル伝達分子を導入し、分化抑制能、増殖促進能などを比較した結果、ES細胞に活性化型Notch1を導入した場合、embryoid bodyから形成されるsecondary colonyは、再培養によりthird、fourth colonyを形成した。また、活性化型Notch1を発現するレトロウイルスを作成してAGM領域由来の細胞に導入すると混合コロニーが増加することが観察された。これらは活性化型Notch1の分化抑制シグナルが胎児造血でも成体造血でも有効であることを示している。
2)Notchシグナルの造血分化抑制機構の解析
Notchシグナルの造血系に対する分化抑制機構を転写因子の面から解析した。myeloid系、erythroid系転写因子について、正常細胞と活性化型Notch1発現細胞における分化刺激前後での遺伝子発現を比較した。その結果、GATA-2の発現が維持されていることから、Notch1による未熟性の維持が、GATA-2を介している可能性が示唆された。さらに、活性化型Notch1を発現した細胞にDominant negative GATAを発現させることにより、活性化型Notch1の分化抑制効果は消失した。以上より、Notchシグナルによる血液細胞の未熟性の維持には、GATA-2の発現の維持が必要であると考えられた。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Kurokawa,M.: "The Evi-l oncoprotein inhibits c-Jun N-terminal kinase and prevents stress-induced cell death."EMBO J.. 19. 2958-2968 (2000)
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[Publications] Miyazaki,T.: "In Vitro and In Vivo Suppression of Osteoclast Function by Adenovirus Vector-Induced csk Gene."Journal of Bone and Mineral Research. 15. 41-51 (2000)
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[Publications] Shimizu,K.: "Binding of Delta1,Jagged1, and Jagged2 to Notch2 Rapidly Induces Cleavage, Nuclear Translocation, and Hyperphosphorylation of Notch2"Mol.Cell.Biol.. 20. 6913-6922 (1999)
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[Publications] Shimizu,K.: "Mouse Jagged1 physically interacts with Notch2 and other Notch receptor : assessment by quantitative methods."J.Biol.Chem.. 274. 32961-32969 (1999)
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[Publications] Takayanagi,H.: "Suppression of arthritic bone destruction by adenovirus-mediated csk gene transfer to synoviocytes and osteoclasts."J.Clin.Invest. 104. 137-146 (1999)
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[Publications] Takahashi,T.: "A Potential Molecular Approach to Ex Vivo Hematopoietic Expansion With Recombinant Epidermal Growth Factor Receptor-Expressing Adenovirus Vector.."Blood. 91. 4509-4515 (1998)
