2001 Fiscal Year Annual Research Report
Cyclin D1を分子標的とした治療不能消化器癌に対する遺伝子治療研究
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12770684
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
山本 浩文 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30322184)
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| Keywords | cyclin D1 / 遺伝子治療 / アデノウイルス / アンチセンス / 消化器癌 / 大腸癌 / 肝癌 |
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| Research Abstract |
(目的)Antisense cyclin D1(CyD1)を用いた消化器癌遺伝子治療の臨床応用のためには,いろいろの遺伝子異常背景をもった多数の癌細胞株を用いた検定が必須である。
(検討項目と結果)
A.癌細胞のCyD1量,遺伝子異常背景についての検討
大腸癌細胞株5種類,肝癌細胞株4種類について,RT-PCR法でCyD1 mRNA発現を,western blot法で蛋白量を検討した。またp53,K-raS, APC, beta-cateninの遺伝子背景について検討した。
B.Adenovirus発現系の構築
Simplified adenovirus transfer system(PNAS;95:2509-2514,1998)を用いて,感染により各種細胞株にantisense CyD1 mRNAを発現させる系を確立する。(進行状況)pcDNA3-CyD1plasmidより,CyD1cDNAを切り出し,adenovirus shattle vectorにantisense方向にsubcloningした。次に,adenovirus backbone vector(Easy1)とelectroporation法により特殊大腸菌の中で融合させ,recombinant AS CyD1 vectorを得た。同様に,遺伝子の組み込まれていないMock vector,およびGFPを発現するコントロールplasmid, FP+antisense CyD1を発現するplasmidの作製が完了した。さらに293細胞によってウイルス液を濃縮・精製して,生物学的効果判定の実験をすすめている。現在のところantisense CyD1は腫瘍の血管新生を抑制することがわかり、そのメカニズムを調べている。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Miyata H, Yamamoto H, et al.: "Overexpression of CDC25B overrides radiation-induced G2-M arrest and results in increased apoptosis in esophageal cancer cells"Cancer Res. 61. 3188-3193 (2001)
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[Publications] Miyake Y, Yamamoto H, et al.: "Extensive micrometastases to lymph nodes as a marker for rapid recurrence of colorectal cancer : a study of lymphatic mapping"Clin Cancer Res. 7. 1350-1357 (2001)
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[Publications] Takamasa I, Yamamoto H, et al.: "Construction of Preferential cDNA Microarray Specialized for Human Colorectal Carcinoma : Molecular Sketch of Colorectai Cancer"Biochem Biophys Res Commun. 285. 1244-1249 (2001)
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[Publications] Nishioka K, Yamamoto H, et al.: "Clinical significance of CDC25A and CDC25B expression in squamous cell carcinomas of the oesophagus"Br J Cancer. 85. 412-421 (2001)
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[Publications] Hayashi N, Yamamoto H, et al.: "Differential expression of cyclooxygenase-2(COX-2)in human bile duct epithelial cells and bile duct neoplasm"Hepatology. 34. 638-650 (2001)
