2000 Fiscal Year Annual Research Report
任意の二重らせんDNAを標的できる人工リプレッサーの医薬分子設計
| Project/Area Number |
12771431
|
|---|
| Research Institution | The University of Tokyo |
|---|
Principal Investigator |
杉山 亨 東京大学, 大学院・総合文化研究科, 助手 (40242036)
|
|---|
| Keywords | RecA / ホルミルウラシル / 5-ホルミル-2'-デオキシウリジン / シッフ塩基 / クロスリンク |
|---|
| Research Abstract |
【目的】我々はすでに、5-ホルミルウリジン(X)のホルミル基がリジンの側鎖アミノ基とシッフ塩基を形成することをアミノ酸とヌクレオシドのレベルで確認している。今年度は大腸菌の遺伝子組換え酵素RecAのDNA結合部位にはL-リジン残基が1つだけ存在することに注目し、X含有オリゴヌクレオチドとのシッフ塩基形成によるクロスリンクをオリゴマーのレベルで検討した。
【合成と解析】RecAのDNA結合部位であるloopL2部位に相当する20アミノ酸残基からなるオリゴペプチドとリジンの位置を変えた変異体をFmoc法により固相合成した。X含有オリゴヌタレオチド(A,23mer)はジオール体として固相合成した後、過ヨウ素酸酸化によりAに導いた。各合成ペプチドと天然DNA(dT)_<21>との結合をCDスペクトルにより調べたところ、天然の配列をもつペプチド(FECO)とN末端から8番目のグリシンをリジンに置換したペプチド(G8K)だけが、DNAの添加によってそのコンホメーションがランダムコイルからβ-シートに変化し、DNAに結合することが分かった。次いで、各ペプチドとAとの結合をゲル電気泳動法により調べたところ、やはりFECOとG8KのみがAと結合した。リジンに置換してもDNA結合活性を保持できるのは8位のグリシンのみで、さらにリジンはL体に制限され、D体ではDNA結合能が失われることも合わせで明らかになった。現在、シッフ塩基形成の有無について詳細に検討しているところである。
|
Research Products
(1 results)
