2000 Fiscal Year Annual Research Report
神経系細胞におけるスフィンゴシン1-リン酸受容体サブタイプとそのシグナル伝達機構
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12780578
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| Research Institution | Gunma University |
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Principal Investigator |
佐藤 幸市 群馬大学, 生体調節研究所, 助手 (00302498)
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| Keywords | 細胞膜受容体 / スフィンゴシン1-リン酸 / GTP結合蛋白質 / Edg / C6グリア腫細胞 / bFGF / Egr-1 / MAPキナーゼ |
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| Research Abstract |
本研究は、神経系細胞における諸機能とスフィンゴシン1-リン酸(S1P)受容体サブタイプとの関連、そのシグナル伝達系の違いなどに検討することを目的としている。平成12年度では、分子生物学的アプロ-チ(受容体分子の遺伝子の導入)および薬理学的アプロ-チ(特異的阻害剤などを用いる)により、アストロ・グリア細胞におけるS1P受容体サブタイプの同定並びにそのシグナル伝達経路を解析した。ラットアストロサイトやC6グリア腫細胞ではS1Pが神経栄養因子の一つ塩基性線維芽細胞成長因子(bFGF)を発現する。この作用はMAPキナーゼ(ERK)の活性化・Egr-1(zinc finger型転写因子)の発現を伴っている。さらに、S1Pは細胞増殖に重要なフォスフォリパーゼD(PLD)活性化応答を引き起こす。C6グリア腫細胞用いて、これらの細胞応答に細胞内でのS1Pの蓄積は不要であり細胞膜受容体を介する可能性を示してきた。実際、C6細胞には2つのS1P受容体(Edg-1、Edg-5)が発現している。そこで、RT-PCRにてクローニングした各S1P受容体遺伝子を導入したS1P受容体過剰発現C6細胞を得た。なお受容体分子の発現確認は^3H-S1P結合能およびベクター由来mRNA発現を調べた。野生型細胞では百日咳毒素(PTX)感受性のERK活性化・bFGF発現が、PTX非感受性のPLD活性化がみられた。受容体発現細胞を用いてS1P作用の解析を行ったところ、ERK活性化・bFGF発現はPTX感受性(Edg-1、Edg-5)経路で引き起こされたが、Edg-1がより低濃度で作用発現した。一方、PLD活性化はPTX感受性(Edg-1)およびPTX非感受性(Edg-5)経路で引き起こされた。このように、野生型C6細胞においてS1PによるERK活性化・bFGF発現応答にはEdg-1が、PLD活性化応答にはEdg-5が関与していると推定された。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Koichi Sato: "Differential roles of Edg-1 and Edg-5, sphingosine 1-phosphate receptors, in the signaling pathways in C6 glioma cells."Mol.Brain Res.. 85. 151-160 (2000)
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[Publications] Yuji Yamazaki: "Edg-6 as a putative sphingosine 1-phosphate receptor coupling to Ca2+ signaling pathway."Biochem.Biophys Res Commun.. 268. 583-589 (2000)
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[Publications] Takao Kimura: "Sphingosine 1-phosphate stimulates proliferation and migration of human endothelial cells possibly through the lipid receptors, Edg-1 and Edg-3."Biochem J.. 348. 71-76 (2000)
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[Publications] Naoya Murata: "Quantitative measurement of sphingosine 1-phosphate by radioreceptor-binding assay."Anal.Biochem.. 282. 115-120 (2000)
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[Publications] Naoya Murata: "Regulation by plasma components especislly lipoproteins of sphingosine 1-phosphate receptor-mediated actions."Biochem J.. 352. 809-815 (2000)
