2000 Fiscal Year Annual Research Report
FRETを用いる低分子脂溶性活性物質レセプターの動態イメージング
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12877005
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
河田 光博 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (60112512)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
森田 規之 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (50239662)
西 真弓 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (40295639)
小澤 一史 京都府立医科大学, 医学部, 助教授 (60169290)
松田 賢一 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (40315932)
井之川 仁 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (40285250)
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| Keywords | CFP / YFP / 培養細胞 / リアルタイムイメージング / エストロゲンレセプター / 共役因子 / 核内動態 / FRET値 |
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| Research Abstract |
平成12年度においては、GFPの改変型であるCFP(cyan fluroscent protein、励起波長433/453nm、蛍光波長475/501nm)とYFP(yellow fluroscent protein、励起波長513nm、蛍光波長527nm)を用いて、各種核内レセプターについて検索した。glucocorticoid receptor(GR)やmineralocorticoid receptor(MR)、androgen receptor(AR)はリガンドと作用しない場合は通常細胞質内に存在していたのに対して、estrogen receptor(ER)a/b、progesterone receptor(PR)は核に分布していた。また、共役因子であるSRC-1やp300などはその機能からも核に分布していることが容易に予想されるが、これらのことを培養細胞による遺伝子発現系で確かめた。FRETはそのバックグラウンドをいかに処理するかに正否がかかっており、リガンドが作用しなくても核に存在する(ER)a/bと共役因子をCFPとYFPで標識し、リガンド添加によって核内でのFRET値を算出した。FRET値は供与体と授与体の蛍光強度から授与体の蛍光強度を差し引き、その値を授与体の値で割ったものとなるとした。FRET値が上昇するものは核内で一定の領域に留まるものと、さまざまな領域に変移するものに分けられた。これらは核内でのそれぞれの働きを動的にしめしていると考えられた。
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Research Products
(8 results)
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[Publications] Yoshida,M. et al: "The distributions of apoptotic cells in the medial preoptic areas of male and female neonatal rats."Neurosci.Res.. 36. 1-7 (2000)
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[Publications] Matsushita,H. et al: "Changes in Nitric Oxide Synthase-Containing Neurons in the Brain of Thiamine-Deficient Mice."Acta Histochem.Cytochem.. 33. 67-72 (2000)
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[Publications] Ito,T. et al: "In vitro and in vivo immunocytochemistry for the distribution of mineralocorticoid receptor with the use of specific antibody."Neurosci.Res.. 37. 173-182 (2000)
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[Publications] Yang,Y. et al: "Postnatal development of NADPH-diaphorase activity in the rat : The role of nitric oxide in the ontogeny of arginine vasopression and oxytocin."Endocrine Journal. 47. 601-613 (2000)
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[Publications] Xie,C-X. et al: "Immunohistochemical study of nucleoporin p62 in the hippocampus and hypothalamus of the rat brain."NeuroReport. 13. 2965-2967 (2000)
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[Publications] Nishi,M. et al: "Trophic interactions between brain-derived neurotrophic factor and S100b on cultured serotonergic neurons."Brain Res.. 868. 113-118 (2000)
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[Publications] Ogawa,H. et al: "Localization of nuclear coactivators p300 and steroid receptor coactivator 1 in the rat hippocampus."Brain Res.. 890. 197-202 (2001)
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[Publications] Kawata,M. et al: "Molecular Steroidogenesis"Universal Academy Press Inc., Tokyo, Japan. 442 (2000)
