2000 Fiscal Year Annual Research Report
マトリックスメタロプロテアーゼを過剰発現するトランスジェニックウサギモデルの開発:動脈硬化病変(プラーク)の安定化に及ぼすMMP-12の影響について
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12877031
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| Research Institution | University of Tsukuba |
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Principal Investigator |
范 江霖 筑波大学, 基礎医学系・病理, 講師 (60272192)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
卯木 浩之 筑波大学, 基礎医学系・病理, 助手 (40323290)
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| Keywords | MMP / 高脂血症 / 動脈硬化 / 動物モデル / トランスジェニックウサギ / 遺伝子導入モデル |
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| Research Abstract |
ドナーウサギより採取した受精卵総数280個中、マイクロインジェクションで遺伝子を注入し偽妊娠(仮親)雌の卵管内に移植した結果、22羽のウサギが産まれた。そのうち2羽はヒトMMP-12の遺伝子導入に成功した。MMP12トランスジェニックウサギである2羽Founderウサギは、正常な繁殖能を持ち系統化されている。トランスジェニックウサギを用いて、肺胞マクロファージ及び腹腔内マクロファージからmRNAを抽出し、ヒトMMP-12に対する特異的なプライマーでRT-PCRを行った結果、ヒトMMP-12はマクロファージのみで特異的に発現していることが判明した。ヒトMMP-12の蛋白質を測定するために、ウサギの腹腔内マクロファージを無血清培地で24時間培養し、培養上清を調製した。また、マクロファージを活性化するため、PMAを添加した無血清培地で24時間培養した後の培養上清も調製した。これらの培養上清を10%ポリアクリルアミドゲルで電気泳動後、抗ヒトMMP-12抗体でウェスタンブロットしたところ、PMAで活性化されたトランスジェニックウサギのマクロファージからヒトMMP-12蛋白が分泌されていることが判明した。また、ヒトMMP-12の活性に関してもZymographyで解析した。β-caseinを含むSDS-PAGEで培養上清を泳動し、Commassie brilliant blueで染色した。これによりヒトのMMP-12がcaseinを消化しており、酵素活性を持つことが判明された。
以上の結果より我々はMMP12トランスジェニックウサギの作製に成功し、また、ヒトMMP-12が活性を持っていることを確認した。このモデルは動脈硬化や肺気腫やリュウマチ関節炎などの研究には有用なモデルになるものと思われる。
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[Publications] Fan,J.,Unoki,H.,Watanabe,T.: "Role of endothelin-1 in atherosclerosis"Ann.New York Acad Sci.. V. 84-94 (2000)
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[Publications] Fan,J.,Challah,M.,Shimoyamada,H.,Watanabe,T.: "Transgenic rabbits expressing human apo (a) as a useful model for the study of Lipoprotein (a)"Ann.New York Acad Sci.. V. 347-351 (2000)
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[Publications] Fan,J.,Challah,M.,Shimoyamada,H.,Marcovina,S.,Watanabe,T.: "Defects of LDL receptor in transgenic WHHL rabbits lead to a marked accumulation of plasma lipoprotein (a)"J.Lipid Res.. 41. 1004-1012 (2000)
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[Publications] Wu,L.,Fan,J.,Watanabe,T.: "Induction and regulation of matrix metalloproteinase-12 by cytokines and CD-40 signaling in monocyte/macrophages"Biochem Biophys Res. Commun. 269. 808-815 (2000)
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[Publications] Kobayashi,T.,Miyauchi,T.,Iwasa,S.,Fan,J.,Nagata,M.,Watanabe,T.: "Corresponding distributions of increased endothelin-B receptor expression and increased endothelin-1 expression in the aorta of apoE-deficient mice with advanced atheroscterosis"Pathol Int.. 50. 929-936 (2000)
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[Publications] Fan,J.,Challah,M.,Shimoyamada,H.,Marcovina,S.,Watanabe,T.: "Defects of LDL receptor in transgenic WHHL rabbits lead to a marked accumulation of plasma lipoprotein (a)"J.Lipid Res.. 41. 1004-1012 (2000)
