レトロウイルス調節遺伝子bel geneを用いた肺線維症実験モデル動物の作製

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12877094
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 瀬山 邦明 順天堂大学, 医学部, 講師 (10226681)
• Keywords: 間質性肺炎 / レトロウイルス / 調節遺伝子 / 遺伝子導入

Research Abstract

Human Foamy Virus(以下HFV)の野性株と同等の感染力を持つinfectious full length cloneを作製した.そのinfectious cloneからbel1の部分をdeleteしたdeletion cloneを作製し,それを培養細胞に形質転換して,infectious cloneとその感染力価を測定して比較すると,deletion cloneの方が,著明に感染力価が低下しており,bel1がHFVの感染に重要な役割を持っていることが示唆された.
pCAGベクターは,その中に強力なCAGプロモーターを持ち,Transgenic mouseの全臓器でインサートされた遺伝子を強力に発現する.そこで,HFVのinfectious cloneをテンプレートとして,PCRでbel1部位を増幅し,それをpCAGベクターへ挿入し,pCAG-bel1 cloneを作製した.
B6C3F1マウスを用いて,その卵にpCAG-bel1 cloneをmicroinjectionし,その卵をマウスの卵管に戻して,bel1のtransgenic mouseを作製した.Day 21に15匹のマウスが誕生し,生後3週間で尾からDNAを採取し,bel1が挿入されているかどうかのスクリーニングを行う予定であったが,生後2週間で同室のマウスより,mouse hepatitis virus(以下MHV)に感染し,蔓延を防ぐ目的で全部屠殺された.現在,もう1度マウスの卵へのmicroinjectionを試み,Trangenic mouseの作製を進行しているところである.それが,完成すれば,病理学的検索を行い、肺に線維化が起こっているかどうかを検討し,喫煙や高濃度酸素などのさまざまな負荷に対して起こってくる線維化の程度を,正常コントロールと比較する予定である.