2000 Fiscal Year Annual Research Report
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12877128
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| Research Institution | Fujita Health University |
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Principal Investigator |
浅野 喜造 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (40131180)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
須賀 定雄 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (70257616)
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| Keywords | VZV / リアルタイムPCR / 噴霧 |
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| Research Abstract |
1)高力価VZVウイルス液作成:VZV河口株と岡親株をMRC-5へ接種。CPEが最高に達した時点で感染細胞をharvestし、超音波破砕。各ストックウイルス液についてウイルス量を測定した後-80℃へ保存。以下の実験に使用した。
2)メンブレンからの効率的なVZV分離法:ミリポアフィルター用のメンブレンを1cm四方に切った物を用意し、1)で作製したVZVウイルス液の希釈系列を作り、それぞれのウイルス液をメンブレンへ塗布。メンブレンをそのままMRC-5に接触させ2時間吸着する方法と、メンブレンを細切した後トリプシン処理したMRC-5と混ぜ遠心(2,000rpm×30分)しdishへまく方法を比較。後者の方が、約10倍感度が優れていることが判明した。
3)ウイルス液を噴霧したメンブレンからのVZV分離:1)で作製したウイルス液の希釈系列を作り、ウルトラネブライザーで密閉容器内へ噴霧。噴霧直後に容器内の空気をエアサンプラーで採取し、ミリポアフィルターを通した。フィルター内のメンブレンを直ちに取り出し、2)で検討した2種類のウイルス分離方法に従いMRC-5へ接種。現在進行中。
4)VZVゲノムの定量的評価法開発:VZVのgBをコードする遺伝子領域にプライマーとプローブを設定。ウイルスゲノム数定量評価のための標準曲線を作るため、PCR産物をTAクローニング法にてサブクローニングし、プラスミドの希釈系列を作製。次に、そのプラスミドの希釈系列をテンプレートとして、ABI7700を使用してリアルタイムPCR法を実施。10コピーまで検出可能なことを確認した。さらにVZVウイルス液以外にHSV-1、HSV-2、CMV、EBV、HHV-6、HHV-7、HHV-8を加えた8種類のヒトヘルペスウイルスについてリアルタイムPCRを実施。VZVのgBのみを特異的に増幅することを確認した。
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[Publications] Argaw T et al.: "Nucleotide sequences that distinguish Oka vaccine from parental Oka and other varicella-zoster virus isolates"J Infect Dis. 181. 1153-1157 (2000)
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[Publications] Tsuji T et al.: "Induction of apoptosis in lymphoid tissues of mice after intramuscular injection of enterotoxigenic Escherichia coli enterotoxin."Immunobiology. 201. 377-390 (2000)
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[Publications] Yoshikawa T et al.: "Invasion by human herpesvirus 6 and human herpesvirus 7 of the central nervous system in patients with neurological signs and symptoms."Arch Dis Child. 83. 170-171 (2000)
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[Publications] Yoshikawa T et al.: "Immune response to gangliosides in a case of Guillain-Barre syndrome after varicella."Arch Dis Child. 83. 172-173 (2000)
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[Publications] Yoshikawa T et al.: "Human herpesvirus 6 infection after living related liver transplantation."J Med Virol. 62. 52-59 (2000)
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[Publications] Yoshikawa T et al.: "Rapid contamination of the environments with varicella-zoster virus DNA from a patients with herpes zoster."J Med Virol. 63. 64-66 (2001)
