うつ病患者におけるグルココルチコイドホルモン受容体異常の分子生物学的検討-視床下部-下垂体-副腎系機能異常との関連-

2000 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 12877149
• Research Institution: Yamaguchi University
• Principal Investigator: 橋本 学 山口大学, 医学部・附属病院, 助手 (80314805)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 信本 政昭 山口大学, 医学部・附属病院, 医員(臨床) ; 原 伸一 山口大学, 医学部・附属病院, 助手 (70314804) ; 渡辺 義文 山口大学, 医学部, 教授 (90182964) ; 大楽 良和 山口大学, 医学部・附属病院, 医員(臨床) ; 國生 成司 山口大学, 医学部・附属病院, 医員(臨床)
• Keywords: グルココルチコイド受容体 / α,β isoform / うつ病 / リンパ球 / SSCP法

Research Abstract

本研究は、うつ病の原因遺伝子の候補の一つとして、考えられている。視床下部-下垂体-副腎系で重要な役割を担うグルココルチコイド(GC)受容体遺伝子について検討するものである。人リンパ球を試料としてGC受容体遺伝子異常を検討する実験系を構築すると共に、正常人のGC受容体遺伝子にどれほどの多系が存在するかを調べるために、まずは正常人のリンパ球を試料としてRT-PCRSSCP法を行った。リンパ球を蛋白変性剤中でホモジナイズしたライセートをRNA分離用スピンカラムに移し総RNAを得た。得られたRNAをオリゴdTプライマーを用いて逆転写しcDNAを作成した。PCR用のプライマーは、既報に倣いcoding regionを網羅し約400bdのPCR産物を作るようにデザインした。このプライマーを用いて、先のcDNAを鋳型にPCRを行い,GC受容体のαとβのisoformに共通な領域のPCR産物5種とαとβに特有な領域のPCR産物がそれぞれ1種ずつ得られた。PCR産物にホルムアミドを加え加熱・急冷却することにより1本鎖化し、これを温度を一定に保つSSCP用泳動装置でPAGEを行った。ゲルを銀染色することにより1本鎖化した2本のバンドを得た。正常人5人のSSCPの結果では多系は確認されず、正常人におけるGC受容体遺伝子の多系の頻度は高くないと思われた。今後は、プライマーデザインを改良して300bpのPCR産物でSSCPを行い、より感度のよい変異の検索を行うと共に、対象をnon-coding regionにまで広げてSSCPを行う予定である。また、今回構築した実験系を用いてうつ病患者のGC受容体遺伝子異常を検討していく予定である