2012 Fiscal Year Annual Research Report
RNA分解システムP－bodyによるPKCシグナル制御メカニズムの解明
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12J10593
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| Research Institution | Kinki University |
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Principal Investigator |
土井 章 近畿大学, 薬学研究科, 特別研究員(DC1)
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| Keywords | PKC / MAPK / 細胞内シグナル伝達 / RNA分解システム / P-body |
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| Research Abstract |
PKC/MAPKシグナルは細胞の増殖のみならず、がん化の病態にも深く関与しているため、MAPKの活性化と抑制のメカニズムを分子レベルで知ることはがん化のメカニズムを明らかにし、これらの経路を標的とした新規分子標的薬を創製する上でも極めて重要である。本研究は、分裂酵母をモデル生物として、"PKC活性依存的な細胞増殖抑制という表現型を指標にした分子遺伝学的アプローチ"により、PKCシグナル伝達経路の新規抑制遺伝子として同定したRNA分解システムP-body局在因子が、どのようなメカニズムでPKCシグナルの抑制に関わるのかを、遺伝学、生化学、細胞生物学的手法を用いて明らかにすることを目指す。本年度は以下のことを明らかにした。
分裂酵母におけるPKCであるPck2ならびに、PKCシグナル伝達経路の新規抑制遺伝子であるDed1はストレス条件下でP-bodyに局在する。今年度は、これらの因子について各種ドメイン構造を欠損させた変異体、またこれらのタンパク質の活性に重要であると考えられる部位に変異を導入した変異体を作成し、変異Pck2タンパク質の局在を確認した。その結果、Pck2の活性を低下させるような変異を導入することでPck2のP-bodyへの局在が損なわれることが明らかとなった。この結果からPKCの活性化とP-body局在の間には相関性があることが示唆された。さらに、ゲノムワイドなアプローチにより、Ded1以外のP-body局在因子がPKCを抑制的に制御できるかを検討した。その結果、Ded1以外のP-body局在因子では、PKCを抑制できなかったことから、P-body局在因子の中でもDed1が特異的にPKC/MAPKシグナルを抑制的に制御することを明らかとした。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度に研究実施計画の通り順調に進展している。Pck2の各種ドメイン構造を欠損させた変異体や活性部位に変異を導入した変異体を作成することで、Pck2の活性とP-body移行には相関性があることが明らかとなった。
また、Pck2、Ded1の局在移行の詳細なメカニズム解析のため、内因性のtdTOMATO融合タンパク質を作成し局在観察を行った。その結果、内因性のPck2とDed1についても、ストレス条件下でP-bodyに移行することが明らかとなった。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度に新たに作製したPck2およびDed1の各種ドメイン構造を欠損させた変異体や活性部位に変異を導入した変異体を使用して、Pck2とDed1の相互作用に必要な部位を同定する。
また、Pck2の活性化機構とP-body局在における関係性をより明らかにする目的で、PKC阻害薬添加におけるPck2のP-body局在を検討する予定である,
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