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2013 Fiscal Year Annual Research Report

免疫調節機構における RNA 結合タンパク質 NF45 の生理的機能解析

Research Project

Project/Area Number 12J10665
Research InstitutionKochi University

Principal Investigator

戸高 寛  高知大学, 総合人間自然科学研究科, 特別研究員(DC1)

KeywordsNF45 / NF90 / RNA結合タンパク質 / TCR / miRNA / 筋成熟 / 筋疾患
Research Abstract

RNA結合タンパク質であるNuclear Factor 45 (NF45)とその結合パートナーであるNF90の複合体(NF45-NF90)は、転写、mRNAの安定化、ウイルスRNA複製制御及びmicroRNA{miRNA)生合成抑制など様々な機能を果たすことが知られている。特に免疫調節において、NF45はIL-13及びIL-2の転写制御に関与することが示されている。しかしながら、これらの報告は細胞を用いた解析で個体レベルにおけるNF45及びF45-NF90の役割は不明な点が多い。本研究では個体レベルにおけるNF45及びNF45-NF90の免疫調節機構及び生体機能を解明するため、NF45を過剰発現させた(Tg)マウスとNF45-NF90Tgマウスを用いて表現型解析を行った。
本年度はNF45 Tgマウスにおける表現型解析としてNF45がサイトカイン発現に影響するか検討するため、NF45が発現調節するサイトカインとして報告のあるIL-43の発現検討をqRT-PCRにより解析した。その結果、野生型及びNF45TgマウスのIL-13発現に顕著な差はみられなかった。この結果より個体レベルにおけるNF45はIL-13の直接の標的でないことが示唆された。
一方でNF45-NFgoTgマウスは、前年度の解析で骨格筋量が減少し、筋成熟促進に働くmiRNAが減少することを明らかにした。本年度は上記の分子メカニズムの解明を試みた。その結果、NF45-NFgoは筋成熟miRNAの前駆体に結合し、プロセシングを抑制することで筋成熟miRNA産生を抑制することを明らかとした。またNF45-NF90によって産生調節される筋成熟miRNAの標的で中心核病や先天性ミオパチー等の筋疾患の原因遺伝子として知られる因子の発現が野生型と比べNF45-NF90 Tgマウスにおいて増加することを見出した。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

NF45 Tgマウスの解析ではIL-13発現に変動がないことが明らかとなった。一方で、NF45-NF90 Tgマウスを用いた解析ではNF45-NFgo複合体は筋成熟miRNA生合成の抑制を通して、筋疾患原因遺伝子の発現を促進することで、骨格筋の未成熟化を引き起こすことを見出すことができた。この成果は学術集会で発表し、現在論文執筆を行っている。

Strategy for Future Research Activity

上記の解析より、NF45は直接IL-13に作用していないことが考えられた。そこで次年度では、NF45が直接標的とするサイトカインを網羅的に探索するため、NF45 Tgマウス及びNF45を過剰発現またはノックダウンさせた培養細胞を用いてPCR arrayを行う。この解析を足掛かりとして、NF45によるサイトカイン産生制御メカニズムの全容を明らかにする予定である。
NF45-NF90複合体の個体レベルにおける機能解析に蘭しては、NF45-NF90が骨格筋の未成熟化による疾患の発症に関与するかを検討するため、筋疾患患者、筋疾患モデル動物、未成熟及び成熟した骨格筋細胞を用いてNF45及びNF90の発現量を解析する。

  • Research Products

    (9 results)

All 2014 2013

All Presentation (9 results)

  • [Presentation] microRNA生合成抑制に関与するNF90タンパク質の構造領域の同定2014

    • Author(s)
      山口史佳, 戸高寛, 樋口琢磨, 森澤啓子, 杉山康憲, 坂本修士
    • Organizer
      第13回KMSResearchMeeting
    • Place of Presentation
      高知大学(高知)
    • Year and Date
      20140219-20
  • [Presentation] 細胞内リン酸化シグナリング解析法の開発2014

    • Author(s)
      杉山康憲, 森澤啓子, 樋口琢磨, 戸高寛, 山口史佳, 安東徳子, 坂本修士
    • Organizer
      第13回KMS ResearchMeeting
    • Place of Presentation
      高知大学(高知)
    • Year and Date
      20140219-20
  • [Presentation] 二本鎖RNA結合タンパク質NF90-NF45複合体はmiR-133の生合成抑制を介して筋成熟を抑制する2013

    • Author(s)
      戸高寛, 樋口琢磨, 矢生健一, 山口史佳, 森澤啓子, 福島敦樹, 津田雅之, 杉山康憲, 坂本修士
    • Organizer
      第36回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド(兵庫)
    • Year and Date
      20131203-06
  • [Presentation] 肝癌細胞においてNF90'NF45複合体はmiR-7の生合成抑制を介してEGFRの発現を制御する2013

    • Author(s)
      樋口琢磨, 戸高寛, 森澤啓子, 山口史佳, 小野正文, 津田雅之, 杉山康憲, 谷口武利, 坂本修士
    • Organizer
      第36回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド(兵庫)
    • Year and Date
      20131203-06
  • [Presentation] Identification of a motif in NF90 protein that is involved in inhibition of microRNA biogenesis2013

    • Author(s)
      山口史佳, 戸高寛, 樋口琢磨, 森澤啓子, 杉山康憲, 坂本修士
    • Organizer
      第36回日本分子生物学会年会
    • Place of Presentation
      神戸ポートアイランド(兵庫)
    • Year and Date
      20131203-06
  • [Presentation] NF90-NF45複合体のmicroRNA生合成抑制に伴う骨格筋成熟不全2013

    • Author(s)
      戸高寛, 樋口琢磨, 矢生健一, 森澤啓子口史佳, 池恩變 , 福島敦樹, 津田雅之, 杉山康憲, 坂本修士
    • Organizer
      第15回日本RNA学会年会
    • Place of Presentation
      愛媛県民文化会館・ひめぎんホール(愛媛)
    • Year and Date
      20130724-26
  • [Presentation] 肝細胞癌におけるNF90-NF45によるmiR-7生合成阻害2013

    • Author(s)
      樋口琢磨, 戸高寛, 山口史佳, 森澤啓子, 小野正文, 杉山康憲, 津田雅之, 坂本修士
    • Organizer
      第15回日本RNA学会年会
    • Place of Presentation
      愛媛県民文化会館・ひめぎんホール(愛媛)
    • Year and Date
      20130724-26
  • [Presentation] NF90-NF45複合体によるmiRNA産生調節を介した筋成熟抑制2013

    • Author(s)
      戸高寛, 樋口琢磨, 矢生健一, 森澤啓子, 山口史佳, 池恩變 , 福島敦樹, 津田雅之, 杉山康憲, 坂本修士
    • Organizer
      第54回日本生化学会中国・四国支部例会
    • Place of Presentation
      徳島大学(徳島)
    • Year and Date
      20130531-0601
  • [Presentation] NF90及びNF45によるmiRNA-7生合成阻害を介した腫瘍化制御機構の解明2013

    • Author(s)
      樋口琢磨, 戸高寛, 池恩變, 山口史佳, 森澤啓子, 小野正文, 杉山康憲, 津田雅之, 坂本修士
    • Organizer
      第54回日本生化学会中国・四国支部例会
    • Place of Presentation
      徳島大学(徳島)
    • Year and Date
      20130531-0601

URL: 

Published: 2015-07-15  

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