2001 Fiscal Year Annual Research Report
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13024201
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
三輪 聡一 北海道大学, 大学院・医学研究科, 教授 (40157706)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
服部 裕一 北海道大学, 大学院・医学研究科, 助教授 (50156361)
深尾 充宏 北海道大学, 大学院・医学研究科, 助手 (10250432)
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| Keywords | 内皮由来過分極因子 / 血管内皮細胞 / 血管平滑筋細胞 / 内皮由来弛緩因子 / チトクロームP450 |
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| Research Abstract |
本特定領域研究の目的は、血管内皮細胞から放出され血管を弛緩する内皮由来過分極因子(EDHF)を分離・同定することである。我々は、まず、クローン化したKチャネルを用いたEDHFのバイオアッセイ系の確立を試みた。EDHF反応が再現性良く見られるラット腸間膜動脈において、各種カリウムイオンチャネル阻害薬を投与したところ、BK channelの阻害薬であるcharybdotoxinとSK channelの阻害薬であるapaminを同時投与した時に完全にEDHFによる弛緩反応ならびに過分極反応が阻害された。すなわち、EDHF反応に関与するカリウムイオンチャネルとしては、Ca^<2+>-activated K^+ channelが予想された。そこで各種Ca^<2+>-activated K^+ channelに特異的なプライマーを作製し、ラット腸間膜動脈においてRT-PCRを施行したところ、三種類のCa^<2+>-activated K^+ channelが発現していることを確認した。その中の一つであるBK channel α-subunitの遺伝子をHEK293細胞に発現させると、脱分極ならびに細胞内カルシウムイオンの上昇に伴い活性化されるカリウムイオン電流が確認された。EDHFの候補の一つとして、チトクロームP450代謝産物であるepoxyeicosatrienoic acid (EET)があげられている。そこで、EETをBK channelを発現させたHEK293細胞に投与したところEETはBK channelの電流を増加させた。その機序としては、EETがG蛋白質であるGαsの活性化を介してBK channelを活性化していることが推定された。その他、他のCa^<2+>-activated K^+ channelも現在cloning中で、EDHFとの関連を検討中である。
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[Publications] Yoshifumi Kawanabe: "Molecular mechanism for endothelin-1-induced stress fiber formation ; Analysis of G proteins using mutants of endothelin type A receptor"Mol Pharmacol. 61(2). 277-284 (2002)
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[Publications] Yoshifumi Kawanabe: "Identification of the Ca^<2+> channels activated by noradrenaline in Chinese hamster ovary cells expressing α_<1A>-, α_<1B>-or α_<1D>-adrenergic receptors"J Pharmacol Exp Ther. 299(3). 901-907 (2001)
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[Publications] Hidekatsu Furutani: "Comparison of Ca^<2+> entry channels involved in contractions of rat aorta induced by endothelin-1, noradrenaline and vasopressin"J Cardiovasc Pharmacol. (in press). (2001)
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[Publications] Ken Lee: "Failure of endothelin-1 to activate store-operated Ca^<2+> channels by lack of mobilization from intracellular Ca^<2+> stores in cultured bovine adrenal chromaffin cells"Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol. 364. 42-46 (2001)
