2001 Fiscal Year Annual Research Report
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13043039
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
関口 猛 九州大学, 大学院・医学研究院, 助手 (60187846)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中山 敬一 九州大学, 生体防御学研究所, 教授 (80291508)
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| Keywords | RCC1 / RagA / RNA結合タンパク質 / Skp2 / ユビキチン化 / p27^<Kip1> |
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| Research Abstract |
関口は、in vivoで無機リン酸を細胞にとりこましてRCC1がM期にリン酸化しているのを確認した。In vitroでcdc2,cdk2キナーゼでリン酸化されるのを確認した。また、RCC1の核移行に関わる遺伝子Kapalpha3/QipとRCC1が強く結合し、RCClのアミノ末端の8-29アミノ酸残基の間に結合しているのを確認した。また、RCC1に関連するRagAと相互作用するRagC, RagDを解析するためにヴァキュロウイルスの系で大量生産し精製した。RagAと相互作用する蛋白質227もヴァキュロウイルスの系で大量生産し、RagAばかりでなくRagCとも相互作用することを確認した。In vitroで227とRagAとRagCの結合領域を同定した。さらに、227のアミノ末端でRNAに結合する活性があるのを確認した。
中山は、Skp2ノックアウトマウスのリンパ球細胞を用いて、増殖刺激によって細胞増殖を誘導するとp27^<Kip1>が速やかに分解されることを観察した。S期〜G2期にかけて正常では見られないp27^<Kip1>の蓄積が開始され、最終的に細胞周期が停止する。このような現象はリンパ球だけでなく胎仔線維芽細胞でも見られ、これらのことから、p27^<Kip1>の分解はSkp2のみに依存しているのではなく、特にG0-G1移行期における急速なp27^<Kip1>の分解はSkp2以外の分解機構の存在が示唆された。このG0-G1移行期の分解もまたプロテアゾームインヒビターによって抑制されるので、やはりユビキチン化によるタンパク分解であることが予想されれ、Skp2ノックアウトマウスより調製された胎仔線維芽細胞抽出液中特に細胞質分画に、T187のリン酸化非依存的なp27^<Kip1>ユビキチン化活性が存在することを見いだした。現在、このユビキチン化システムの分子同定を試みている。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Sekiguchi, T., Hirose, E., Nakashima, N., Ii, M., Nishimoto, T.: "Novel G proteins, Rag C and Rag D, interact with GTP-binding proteins, Rag A and Rag B"J. Biol. Chem.. 276(10). 7246-7257 (2001)
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[Publications] Hara, T., Kamura, T., Nakayana, K, .Oshikawa, K., Hatakeyama, S., Nakayama, K-I: "Degradation of p27^<KIP1> at the G_0-G_1 transition mediated by a Skp2-independent ubiquitination pathway"J. Biol. Chem.. 276. 48937-48943 (2001)
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[Publications] Kieman, R.E., Emiliani, S., Nakayama, K., Castro, A., Labbe, J.C., Lorca, T., K-I., N., Benkirane, M.: "Interaction between Cyclin T1 and SCF^<SKP2> Targets CDK9 for Ubiquitination and Degradation by the Proteasome"Mol. Cell. Biol.. 203. 77-87 (2001)
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[Publications] Hatakeyama, S., Yada, M., Matsumoto, M., Ishida.N., Nakayama, K.-I.: "U box proteins as a new family of ubiquitin-protein ligases"J. Biol. Chem.. 276. 33111-33120 (2001)
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[Publications] Ageta, H., Kato, A., Hakayama, K.-I., Isojima, Y., Sugiyama, H.: "Regulation of the level of Vest-1S/Homer-1a proteins by ubiquitin-proteasome proteolytic systems"J. Biol. Chem.. 276. 15893-15897 (2001)
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[Publications] Tsukiyana, T., Ishida, N., Shirane, M., Minamishima, Y.A., Hatakeyama, S., Kiagawa, M, Nakayama, K., Nakayama, K.-I.: "Down-regulation of p27^<Kip1> expression is required for development and function of T cells"J. Immunol.. 166. 304-312 (2001)
