2001 Fiscal Year Annual Research Report
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13308041
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
花岡 文雄 大阪大学, 細胞生体工学センター, 教授 (50012670)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
横井 雅幸 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (00322701)
益谷 央豪 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助手 (40241252)
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| Keywords | ヌクレオチド除去修復 / 色素性乾皮症 / XPCタンパク質 / ユビキチン / SUMO-I / チミンDNAグリコシラーゼ |
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| Research Abstract |
研究代表者および研究分担者は、ヌクレオチド除去修復(uncleotide excision repair; NER)や損傷乗り越え複製(translesion synthesis; TLS)などのDNA修復系がどのように制御されているかを総合的に理解すること目的として、以下に述べる研究を行った。
1)COS-1細胞にタグを付加したユビキチンあるいはSUMO-Iを一過性強制発現させ、これらの細胞抽出液からXPCタンパク質を免疫沈降し、タグに対する抗体でイムノブロッティシグを行うことにより、XPCタンパク質のユビキチン化およびSUM0-I化を検出した。その結果、紫外線照射など、DNA損傷を与えた細胞において、これらの修飾がXPCタンパク質に認められた。
2)XPCと相互作用する新規因子を探索する目的で、酵母2ハイブリッド法によるスクリーニングを行ったところ、チミンDNAグリコシラーゼ(TDG)が得られた。TDGは5-メチルシトシンの脱アミノ化にようて生じるG/Tミスマッチを修復する塩基除去修復反応を開始する酵素で、自然突然変異の卸制に寄与しているものと考えられている。組換えタンパク質を用いた生化学的な実験により、XPCはTDGと物理的に相互作用するのみならず、TDGの活性を促進することが示された。
3)ヒトXPC/出芽酵母Rad4のホモログが分裂酵母には2種類(Rhp4A, Rhp4B)存在することを見い出し、それらのNERにおける役割を調べた。生化学的解析から、Rhp4A、Rhp4BともにヒトXPC/出芽酵母Rad4同様、損傷DNAに高い親和性を示した。また遺伝学的解析から、Rhp4Aは出芽酵母Rad4と同様、ゲノム全体の修復(GGR)と転写と共役した修復(TCR)の両方に、またRhp4BはヒトXPCと同じくGGRにだけ機能することが分った。
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Research Products
(6 results)
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[Publications] Ishikawa, T.et al.: "Mutagenic and non-mutagenic Bypass of DNA lesions by Drosophila DNA polymenases dipolη and dipole"J. Biol. Chem.. 276. 15155-15163 (2001)
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[Publications] Levine, R.L. et al.: "Translesion DNA synthesis catalyzed by human polη across I, N6-athenodeoxyadenosine"J. Biol. Chem.. 276. 18717-18721 (2001)
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[Publications] Matsuda, T. et al.: "Error rate and specificity of human and murine DNA polymeraseη"J. Mol. Biol.. 312. 335-346 (2001)
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[Publications] Boudsocq, F. et al.: "Sulfolobus solfataricus P2 DNA polymerase IV(Dpo4): an archaeal DinB-like DNA polymenase with lesion-bypass properties akin to aukaryotic polη"Nucleic Acids Res.. 29. 4607-4616 (2001)
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[Publications] Kuraoka, I. et al.: "Oxygen free-radical damage to DNA polymenas η and resistanteto exonaclease action at cyclopurine deoxynucleaside residues"J. Biol. Chem.. 276. 49283-49288 (2001)
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[Publications] Broughton, B.C. et al.: "Molecular analysis of mutations in DNA polymenase η in xeroderma pigmentosum-variant residues"Proc. Natl. acad. Sci. USA. 99. 815-820 (2002)
