小胞体品質管理機構を担う2種の新規分子シャペロンの研究

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13308042
• Research Institution: Kyoto University
• Principal Investigator: 永田 和宏 京都大学, 再生医科学研究所, 教授 (50127114)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 久保田 広志 京都大学, 再生医科学研究所, 助手 (80332724)
• Keywords: 分子シャペロン / 小胞体関連分解 / EDEM / 小胞体マンノシダーゼI / 品質管理

Research Abstract

1.コラーゲン特異的分子シャペロンHSP47によるコラーゲンの分泌促進効果を調べるため、hsp47-/-ES細胞を分化誘導し、その際に合成されるIV型コラーゲンの分泌速度について検討した。hsp47-/-ES細胞から分泌されるコラーゲンの分泌速度は、hsp47+/+ES細胞における分泌速度に較べて顕著に遅くなっていることが明らかになり、また分泌されるコラーゲンの物性にも差のあることが明らかになった。さらに、embryoid bodyを作成して、IV型コラーゲンを主構成成分とする基底膜形成を調べたところ、基底膜の形成においても、hsp47-/-ES細胞のembryoid bodyにおいては欠陥のあることが明らかになり、これらはいずれもコラーゲンの品質管理にHSP47が必須の役割を持っていることを示唆している。
2.小胞体品質管理に重要な役割をもつEDEMの作用機構を明らかにするため、EDEMの上流因子の解析を行った。その結果、小胞体マンノシダーゼI (ER ManI)がEDEMと同じく小胞体関連分解を促進することを見いだした。ER ManIによる分解はEDEMと相加的な効果を持っており、また両者は小胞体において別々のコンパートメントに存在していることも明らかにした。現在EDEMと相互作用する小胞体内シャペロン様因子の同定を進めている。

Research Products

• [Publications] S.MURAKAMI: "Heat Shock protein(HSP)47 and collagen are upregulated during neointimal formation in the balloon-injured rat carotid artery"Atherosclerosis. 157. 361-368 (2001)
• [Publications] M.KIKUCHI: "A single chain Fv fragment 2A3 specific for native lysozyme : Isolation from a human synthetic phage display antibody library and characterization"J. Biochem.. 129. 237-242 (2001)
• [Publications] O.MATSUSHITA: "Substrate recognition by the oollagen-bindim^2g domain of clostridium histolyticum class I collagenase"J. Biol. Chem.. 276(12). 8761-8770 (2001)
• [Publications] M.NAITOH: "Upregulation of HSP47 and collagen type III in the dermal fibrotic desease, keloid"Biochem Biophys Res Commun.. 280. 1316-1322 (2001)
• [Publications] N.HOSOKAWA: "A novel ER α -mannosidase-like protein accelerates ER-associated degradation"EMBO Reports. 2(5). 415-422 (2001)
• [Publications] K.NAKATSUKASA: "Mnl1p, an α -mannosidase-like protein in yeast Saccaromyces cerevisiae, is required for ER associated degradation of glycoproteins"J. Biol. Chem.. 276(12). 8635-8638 (2001)