2002 Fiscal Year Annual Research Report
効率的ヒト遺伝子機能解析のためのヒト培養細胞を用いたRNA干渉法の確立
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13358012
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
西郷 薫 東京大学, 大学院・理学系研究科, 教授 (50136454)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
程 久美子 東京大学, 大学院・理学系研究科, 特任助教授 (50213327)
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| Keywords | RNAi / RNA干渉法 / Dicer / eIF2C1 / インターフェロン / 哺乳類 / ヒト / マウス |
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| Research Abstract |
RNA interference、(RNAi)は、長い2本鎖RNAに依存した遺伝子の転写後抑制機構(Posttranscriptional gene silencing,PTGS)である。下等真核生物においては、細胞質に入った長い2本鎖RNAは、RNase III様の酵素活性を持つ、Dicerと呼ばれるタンパクによって21-23塩基対のshort interfering RNA(siRNA)に切断され、標的mRNAを切断するガイドとして働くと考えられている。一方、哺乳類では、長い2本鎖RNAに依存したPTGSが誘導できるのは、恐らくインターフェロン応答のために、特定の細胞種に限られているが、インターフェロン応答を誘発しない合成siRNAを用いると、様々な細胞種において、効率よく遺伝子阻害効果を示す。下等真核生物における生化学的、遺伝学的解析により、DicerおよびPIWIファミリーに属する遺伝子群は長い2本鎖RNAに依存したPTGSに必須であることが示されている。しかし、siRNAに依存したPTGSの分子メカニズムはよくわかっていなかった。我々は、DicerおよびPIWIファミリーに属する翻訳開始因子である、eIF2C1-4が、いずれもsiRNAによるRNAiに関わること、そしておそらくそれらは相乗的に相互作用にする事を示した。さらに、免疫沈降実験の結果から、ヒトおよびマウスにおいて、DicerとeIF2C1、またはDicerとeIF2C2が複合体を形成すること、また、この複合体形成には、eIF2CのPIWIドメインが必須であることを示した。
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