IL-6/受容体複合体の結晶構造解析とcDNA制御手法の開発

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13359003
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 月原 冨武 大阪大学, 蛋白質研究所, 教授 (00032277)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 上坪 宏道 高輝度光科学研究センター, 副会長(研究職) ; 吉崎 和幸 大阪大学, 健康体育部, 教授 (90144485) ; 川合 知二 大阪大学, 産業科学研究所, 教授 (20092546) ; 江島 大輔 味の素株式会社, 医薬研究所, 主任研究員 ; 植木 龍夫 高輝度光科学研究センター, 利用促進部門II, 部門長
• Keywords: インターロイキン-6 / インターロイキン-6受容体 / 複合体 / 結晶構造解析

Research Abstract

IL-6/sIL-6R複合体作成にむけて以下のことを行った。
1.recombinant IL-6を200mg精製した。
2.複合体形成を確認する方法として走査プローブ顕微鏡(原子間力顕微鏡及び走査型トンネル顕微鏡)の可能性を検討するために、IL6分子の単一分子観察を行った。
試料中に含まれているバッファーを透析により減少させたIL6試料をマイカ表面の上に固定化し、大気中原子間力顕微鏡した結果、単一分子及びクラスタを形成したIL6分子の実空間観察に成功した。一方、走査型トンネル顕微鏡においても、同様の処理をほどこしたIL6試料の実空間観察に成功し、超高真空中のCu(111)面に孤立吸着したIL6分子の分子内構造を観察することに成功した。
3.sIL-6R DNA導入CHO細胞の培養上清を20L調製した。予備実験にて抗IL-6レセプター抗体(AUK-181-6)のアフィニティーカラムを用いた精製が有効であることを確認した。
4.IL-6結晶化しそのX線結晶構造解析を行った。IL-6と相互作用すると予測されている部分のペプチド断片、Tyr-Arg-Leu-Arg-Phe-Glu-Leu-Arg-Tyr-Arg-Ala-GluとIL-6の複合体の結晶化を種々の方法で試みた。現時点では双方を含む結晶は得られていない。
5.IL-6/sIL-6R複合体の結合部位決定のため、sIL-6Rおよびgp130の結合部位に特異的に作用し、結合阻害する低分子(AA15mer)を検索している。