抗SRYリボザイム及びアンチセンスSRYトランスジーンによる家畜の性比制御の試み

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13460127
• Research Institution: Azabu University
• Principal Investigator: 舘 鄰 麻布大学, 獣医学部, 教授 (30011711)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 東條 英昭 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 教授 (20041668) ; 横山 峯介 三菱化学生命科学研究所, 生殖工学開発室, 室長 ; 柏崎 直巳 麻布大学, 獣医学部, 助教授 (90298232) ; 久松 伸 麻布大学, 環境保健学部, 講師 (10198997) ; 神作 宣男 麻布大学, 獣医学部, 講師 (60333142)
• Keywords: SRY / アンチセンスRNA / リボザイム / pCAAGS / polIIIプロモーター / トランスジェニックマウス / 性決定 / 性比制御

Research Abstract

本研究の目的は、哺乳類の性決定遺伝子SRYの転写産物に対して、アンチセンスmRNAあるいは、抗SRYリボザイムを遺伝子操作による導入遺伝子として発現させ、出生時性比が雌に傾斜するような、人工的家畜品種を作出するための基礎・開発研究を実施することにある。この目的を達成するために、まず、マウスをモデルとし、現在、最も強力なpromoter/enhancer complexをもつ哺乳類細胞における発現ベクターであるpCAGGS(阪大宮崎-純教授から供与)を用いて、アンチセンスSryを発現させたトランスジェニックマウス(C3B6Fl)を作出し、その生殖巣、生殖器官における表現型の解析を行った。これまでに、12匹(雄10、雌2)のトランスジェニックマウスが得られたが、表現型と遺伝型は全て一致していた。これらのマウスをfounderとして、非トランスジェニックC3B6F1マウスと交配して、Flを得たところ表現型が雌でありながら、PCR解析でY染色体のマーカーであるZfyに対して陽性を示す個体が、39匹のトランスジェニック雌マウス中11匹得られた。現在、これらのマウスについて、なお詳細な表現型および遺伝的解析を行っている。
一方、抗マウスSryリボザイムを、ハンマーヘッド型、tRNA-ribozyme complex型等、数種類を設計した。これらのリボザイムにつき、in vitroにおける、Sry mRNAに対する切断効果を検討した結果、切断効果をもつことを確認した。また、これらリボザイムをin vivoで発現するためのpCAGGS系ならびにpolIIIプロモーター系の発現ベクター(pPUR-KE、東大多比量和誠教授から供与)の構築も完了した。今後、これらのin vivoにおける効果を検討する計画である。

Research Products

• [Publications] Saburi S, Nadano D, Akama TO, Hirama K, Yamanouchi K, Naito K, Tojo H, Tachi C, Fkuda MN.: "The trophinin gene encodes a novel group of MAGE proteins, magphinins, and regulates cell proliferation during gametogenesis in the mouse"J. Biol. Chem.. 276. 49378-49389 (2001)
• [Publications] Uekita T, Tanaka SS, Sato H, Seiki M, Tojo H, Tachi C.: "Expression of membrane-type 1 matrix metalloproteinase (MT1-MMP) mRNA in trophoblast and endometrial epithelial cell populations of the synepitheliochorial placenta of goats (Capra hircus)"Arch. Histol. Cytol.. 64. 411-424 (2001)
• [Publications] Inuzaka H, Yamanouchi K, Tachi C, Tojo H.: "A transgenic mouse model for investigating the response of the upstream region of whey acidic protein (WAP) gene to various steroid hormones"Exp. Anim.. 50. 1-7 (2001)
• [Publications] Nakamura N, Yamakawa N, Sato T, Tojo H, Tachi C, Furukawa K.: "Differential gene expression of beta-1,4-galactosyltransferases I, II and V during mouse brain development"J. Neurochem.. 76. 29-38 (2001)
• [Publications] Nishino K, Yamanouchi K, Naito K, Tojo H.: "Characterization of mesonephric cells that migrate into the XY gonad during testis differentiation"Exp. Cell Res.. 267. 225-232 (2001)
• [Publications] Nishino K, Yamanouchi K, Naito K, Tojo H.: "Matrix metalloproteinases regulate mesonephric cell migration in developing XY gonads which correlates with the inhibition of tissue inhibitor of metalloproteinase-3 by SRY"Dev. Growth Differ.. 44. 35-43 (2002)
• [Publications] 舘 鄰: "応用動物科学への招待"朝倉書店. 145 (2001)