2002 Fiscal Year Annual Research Report

抗SRYリボザイム及びアンチセンスSRYトランスジーンによる家畜の性比制御の試み

Research Project

Project/Area Number	13460127
Research Institution	Azabu University
Principal Investigator	其木茂則麻布大学, 環境保健学部, 教授 (50130894)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	東條英昭東京大学, 大学院・農業生命科学研究科, 教授 (20041668) 横山峯介三菱化学生命科学研究所, 生殖工学開発室, 室長柏崎直巳麻布大学, 獣医学部, 助教授 (90298232) 久松伸麻布大学, 獣医学部, 講師 (10198997) 神作宜男麻布大学, 獣医学部, 講師 (60333142)
Keywords	抗SRYリボザイム / アンチセンスSRY / 家畜 / 性比 / トランスジェニックマウス / SRY / リボザイム / アンチセンス
Research Abstract	本研究の目的は、哮乳類の性決定遺伝子SRYの転写産物に対して、アンチセンスmRNAあるいは、抗SRYリボザイムを遺伝子操作による導入遺伝子として発現させ、出生時性比が雌に傾斜するような、人工的家畜品種を作出するための基礎・開発研究を実施することにある。この目的を達成するために、まず、マウスをモデルとし、現在、最も強力なpromoter/enhancer complexをもつ哮乳類細胞における発現ベクターであるpCAGGS(阪大宮崎純一教授から供与)を用いて、アンチセンスSryを発現させたトランスジェニックマウス(C3B6F1)を作出し、その生殖巣、生殖器官における表現型の解析を行った。これまでに、12匹(雄10、雌2)のトランスジェニックマウスが得られたが、表現型と遺伝型は全て一致していた。これらのマウスをfounderとして、非トランスジェニックC3B6F1マウスと交配して、F1を得たところ表現型が雌でありながら、PCR解析でY染色体のマーカーであるZfyに対して陽性を示す個体が得られた。しかし、これらのマウスについて新たにZfyの検出用プライマーを設計し、さらに、塩基配列に性的2型性を示す遺伝子Ube1を加えて、詳細な遺伝子解析を行ったところ、表現型と遺伝子型の異なる性転換個体の作出は確認出来なかった。一方、抗マウスSryリボザイムを、ハンマーヘッド型、tRNA-ribozyme complex型等、数種類を設計した。これらのリボザイムにつき、in vitroにおける、Sry mRNAに対する切断効果を検討した結果、切断効果をもつことを確認した。また、これらリボザイムをin vivoで発現するためのpCAGGS系ならびにpollllプロモーター系の発現ベクター(pPUR-KE、東大多比量和誠教授から供与)の構築も完了した。Sry遺伝子をtransgeneとしてもつ形質転換細胞に抗Sryリボザイムpollllベクターコンストラクトを導入した実験で、このリボザイムがin vivoにおいてSry mRNA発現抑制効果をもつことを示唆する結果が得られた。

Research Products

(13 results)

All Other

All Publications (13 results)

[Publications] M.Nakai: "Viable piglets generated from porcine oocytes matured in vitro and fertilized by intracytoplasmic sperm head injection"Biology of Reproduction. 68. 1003-1008 (2003)
[Publications] N.Kashiwazaki: "Expression of the IGF2 and the IGF2R in porcine parthenogenetic and biparental fetuses"Theriogenology. 59・1. 423 (2003)
[Publications] M.Nakai: "Fertilization and development to piglets by intracytoplasmic sperm head injection into"Theriogenology. 59・1. 522 (2003)
[Publications] R.Yamaguchi: "Parthenogenetic development in vivo and in vtro of porcine oocytes matured in NCSU-37 or M-199"Cloning and Stem Cells. 4. 297-298 (2002)
[Publications] K.Kikuchi: "Successful piglets production after transfer of blastocysts produced by a modified in vitro system"Biology of Reproduction. 66. 1033-1041 (2002)
[Publications] Cousley, R.J.: "Validity of the Hfm transgenic mouse as a model for hemifacial microsomia"Cleft Palate-Cran. J.. 39. 81-92 (2002)
[Publications] Kitamura, K.: "Mutation of ARX causes abnormal development of forebrain and testes in mice and X-linked lissencephaly with abnormal genitalia in humans"Nature genetics. 32. 359-369 (2002)
[Publications] Migishima, F.: "Successful cryopreservation of mouse ovaries by vitrification"Biology of Reproduction. 68(In press). (2003)
[Publications] Migishima, F.: "Full reconstitution of hematopoietic system by murine umbilical cord blood : Possible phenotypic difference between cord blood and bone marrow stem cell"Transplantation. (In press). (2003)
[Publications] Kobayashi, M.: "Phosphorylation state of tau in the hippocampus of apolipoprotein E4 and E3 knock-in mice"Neuroreport. (In press). (2003)
[Publications] Zadworny D.: "Prolactin and its Receptor in Galliformes : Present and Future Research"Avian Poultry Reviews. 66. 1033-1041 (2002)
[Publications] 横山峯介: "体外受精.シリーズ・バイオサイエンスの新世紀.第15巻,生命工学:新しい生命へのアプローチ"共立出版,東京. 9 (2002)
[Publications] 横山峯介: "動物発生工学,生殖細胞の操作・生殖細胞および胚の保存"朝倉書店,東京. 10 (2002)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

抗SRYリボザイム及びアンチセンスSRYトランスジーンによる家畜の性比制御の試み

Principal Investigator

其木 茂則 麻布大学, 環境保健学部, 教授 (50130894)

Research Products

[Publications] M.Nakai: "Viable piglets generated from porcine oocytes matured in vitro and fertilized by intracytoplasmic sperm head injection"Biology of Reproduction. 68. 1003-1008 (2003)

[Publications] N.Kashiwazaki: "Expression of the IGF2 and the IGF2R in porcine parthenogenetic and biparental fetuses"Theriogenology. 59・1. 423 (2003)

[Publications] M.Nakai: "Fertilization and development to piglets by intracytoplasmic sperm head injection into"Theriogenology. 59・1. 522 (2003)

[Publications] R.Yamaguchi: "Parthenogenetic development in vivo and in vtro of porcine oocytes matured in NCSU-37 or M-199"Cloning and Stem Cells. 4. 297-298 (2002)

[Publications] K.Kikuchi: "Successful piglets production after transfer of blastocysts produced by a modified in vitro system"Biology of Reproduction. 66. 1033-1041 (2002)

[Publications] Cousley, R.J.: "Validity of the Hfm transgenic mouse as a model for hemifacial microsomia"Cleft Palate-Cran. J.. 39. 81-92 (2002)

[Publications] Kitamura, K.: "Mutation of ARX causes abnormal development of forebrain and testes in mice and X-linked lissencephaly with abnormal genitalia in humans"Nature genetics. 32. 359-369 (2002)

[Publications] Migishima, F.: "Successful cryopreservation of mouse ovaries by vitrification"Biology of Reproduction. 68(In press). (2003)

[Publications] Migishima, F.: "Full reconstitution of hematopoietic system by murine umbilical cord blood : Possible phenotypic difference between cord blood and bone marrow stem cell"Transplantation. (In press). (2003)

[Publications] Kobayashi, M.: "Phosphorylation state of tau in the hippocampus of apolipoprotein E4 and E3 knock-in mice"Neuroreport. (In press). (2003)

[Publications] Zadworny D.: "Prolactin and its Receptor in Galliformes : Present and Future Research"Avian Poultry Reviews. 66. 1033-1041 (2002)

[Publications] 横山 峯介: "体外受精.シリーズ・バイオサイエンスの新世紀.第15巻,生命工学:新しい生命へのアプローチ"共立出版,東京. 9 (2002)

[Publications] 横山 峯介: "動物発生工学,生殖細胞の操作・生殖細胞および胚の保存"朝倉書店,東京. 10 (2002)

其木茂則麻布大学, 環境保健学部, 教授 (50130894)

[Publications] 横山峯介: "体外受精.シリーズ・バイオサイエンスの新世紀.第15巻,生命工学:新しい生命へのアプローチ"共立出版,東京. 9 (2002)

[Publications] 横山峯介: "動物発生工学,生殖細胞の操作・生殖細胞および胚の保存"朝倉書店,東京. 10 (2002)