アポトーシス抑制分子EATの生体内機能ならびに疾病における分子機構の解明

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470053
• Research Institution: National Research Institute for Child Health and Development
• Principal Investigator: 梅澤 明弘 国立成育医療センター研究所, 生殖医療研究部, 研究部長 (70213486)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大喜多 肇 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (50317260) ; 秦 順一 国立成育医療センター研究所, 研究所長 (90051614)
• Keywords: アポトーシス / EAT / 発生 / bcl / mcl-1

Research Abstract

発生過程でプログラムされた細胞の死として、アポトーシスは定義される。この機構は、生理的に細胞を除去する場合に利用される。生理的だけではなく病的な変性、虚血、感染症に伴った細胞の死もアポトーシスであるであることが明らかになったきた。アポトーシスを生じる過程の中で、bcl-2ファミリーに属する分子はアポトーシスを促進・阻害を決定し、重要な位置を占める。そのような観点から、アポトーシスの機構を考慮しながら、bcl-2ファミリーのひとつであるヒトEAT遺伝子を標的分子として各種疾患の機序またその治療を押し進める上での分子基盤を明確にすることが本研究の目的である。その目的のために、マウス個体におけるEAT遺伝子のコンディショナル・ターゲッティングとEATを標的とした治療法の開発を進めている。Cre-loxPシステムを用いてES細胞のEAT遺伝子をコンディショナルにノックアウトする。Bcl-2関連遺伝子群の重要な機能ドメインであるBH1〜BH2ドメインを含むexon2の両側にloxP配列を挿入したターゲッティングベクターの作製を成功した。このターゲッティングベクターを用い、ES細胞において相同組換えを終了した。相同組換えを生じさせたES細胞を胚盤胞に入れ、現在、生殖系列へのtransmissionを進行させている。これらのことにより,目的の臓器,組織でEAT遺伝子を破壊することが可能となる。さらに、ES細胞において、二つのアリールのEAT遺伝子のノックアウトを進めている。EAT遺伝子のない状態で、ES細胞が生存できるか、また分化過程におけるアポトーシスを検討する。

Research Products

• [Publications] Ohyama, M.: "Immunologic and histopathologic characterization of active disease model mouse for pemphigus vulgaris"J. Invest. Dermatol.. 118. 199-204 (2002)
• [Publications] Hakuno, D.: "Bone marrow-derived regenerated cardiomyocytes (CMG cells) express functional adrenergic muscarinic receptors"Circulation. 105. 380-386 (2002)
• [Publications] Yabe, H.: "Matrix Metalloproteinase (MMP)-1 and -3 expression in Ewing's sarcoma may be due to loss of accessibility of the MMP regulatory element to the specific fusion protein in vivo"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 293. 61-71 (2002)
• [Publications] Ogawa, S.: "A case of dilated cardiomyopathy with end-stage heart failure treated by prolonged continuous hemodiafiltration"Keio. J. Med.. 51・3. 165-177 (2002)
• [Publications] Suzuki, S.: "Expression of interleukin-6 in cerebral neurons and ovarian cancer tissue in Trousseau syndrome"Clin. Neuropathol.. 21・5. 232-235 (2002)
• [Publications] Shibata, R: "Correlation between a specific Wilms tumor suppressor gene (Wt1) mutation and the histological findings in Wilms tumor (WT)"J. Med. Genet.. 39・12. E83 (2002)
• [Publications] Ochi, K.: "The use of isolated mature osteoblasts in abundance acts as desired-shaped bone regeneration in combination with a modified poly DL-lactic-co-glycolic acid( PLGA)-collagen sponge"J. Cell. Physiol.. 194. 45-53 (2002)
• [Publications] Fukuma, M.: "Up-regulation of 1d2, an oncogenic helix-loop-helix protein, is mediated by the chimeric EWS/ets protein in Ewing sarcoma"Oncogene. 22. 1-9 (2003)