2001 Fiscal Year Annual Research Report
EBウイルスがコードする小RNA EBERの機能解析
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13470062
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
高田 賢蔵 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 教授 (30133721)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
菅野 祐幸 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教授 (40252663)
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| Keywords | EBウイルス / EBER / 小RNA |
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| Research Abstract |
EBウイルス(EBV)がコードする小RNA EBERの機能を明らかにするために以下の2点の検討を行った。
1.EBERトランスジェニックマウスの作製:in vivoにおけるEBERの機能を検討する目的で、EBERトランスジェニックマウスの作製を試みた。EBERはnon-polyadenylated RNAであり、その発現を促進するため、RNAポリメラーゼ-Iでドライブされるコンストラクトを作製した。すなわち、Grummt等の報告(Cell43:801-10,1985)に準拠し、PCRにより得たEBER1及びEBER2断片を、これもPCRによりNIH3T3細胞から増幅したRNAポリメラーゼ-Iプロモーター領域と、同じくターミネーター領域ではさんだコンストラクトを作り、これらをタンデムにつないだものを導入遺伝子とした。マウスの骨髄球系細胞株にトランスフェクトし、一過性の発現を確認した後、トランスジェニックマウスの作製をし、脾臓および胸腺でのEBERの発現を確認した。EBER発現による組織変化、病変発生について現在観察中である。
2.EBERノックアウトEBVの作製:先にEBERノックアウトEBVを作製し、EBERノックアウトによりEBVのBリンパ球不死化能が約100倍低下するとの結果を得た。この時は、SV40のエンハンサーに連結した薬剤耐性遺伝子をEBER遺伝子部分へ挿入しEBER遺伝子をノックアウトした。しかし、この際挿入したSV40のエンハンサーにより近傍のLMP1やEBNA2の発現への影響があり、このことがEBERノックアウトによるEBVのBリンパ球不死化能低下を引き起こした可能性が考えられた。そこで、Cre-loxPシステムを用いて最終的にEBERノックアウト後にSV40のエンハンサーに連結した薬剤耐性遺伝子を含まないEBVを作製した。得られたEBVのBリンパ球不死化能を現在検討中である。
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[Publications] Nanbo, A.: "Epstein-Barr virus RNA confers resistance to interferon-a-induced apoptosis in Burkitt's lymphoma"EMBO J.. (in press).
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[Publications] Takada, K.: "The role of EBERs in oncogenesis (Review)"Cancer Biol.. 11. 461-467 (2001)
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[Publications] Maruo, S.: "Replacement of Epstein-Barr virus (EBV) plasmid with EBV-encoded EBER plasmid in Burkitt's lymphoma cells"J. Virol.. 75. 9977-9982 (2001)
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[Publications] Komano, J.: "Role of bcl-2 in Epstein-Barr virus-induced malignant conversion of Burkitt's lymphoma cell line Akata"J. Virol.. 75. 1561-1564 (2001)
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[Publications] Konishi, K.: "Role of Epstein-Barr virus-encoded latent membrane protein 2A on virus-induced transformation and virus activation"J. Gen. Virol.. 82. 1457-1463 (2001)
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[Publications] Maruo, S.: "Roles of Epstein-Barr virus glycoprotein gp350 and gp25 in the infection of various human epithelial cells"J. Gen. Virol.. 82. 2373-2383 (2001)
