プレT細胞特異的転写因子によるT細胞分化の制御機構

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470068
• Research Institution: CHIBA UNIVERSITY
• Principal Investigator: 齊藤 隆 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (50205655)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 山崎 晶 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助手 (40312946)
• Keywords: 胸腺分化 / プレT細胞レセプター / pTα鎖 / RIT / ノックアウトマウス / ラフト / トランスジェニックマウス / Th1 / Th2

Research Abstract

プレT細胞レセプターは、pre-TCRα鎖(pTα)とTCRβ鎖からなり、胸腺でのT細胞分化の過程において重要な役割を果たしている。本研究では、昨年度にpTα鎖の転写調節を解析し、プロモーター領域を詳細に調べた。今年度は、pre-TCR複合体を介するシグナル伝達機構を解明するために、昨年度単離した新たなcDNA, RITの遺伝子欠損マウスを作製することができ、このマウスの解析を行った。また、pTα鎖が、常にラフトに存在していて、constitutiveな活性化シグナルが入るとする報告を解析するために、LAT-CD3_εキメラ分子を作製して、細胞とマウスに発現させて、その機能を解析した。
(1)RITはpTα発現細胞からサブトラクションによって単離した分子で、CD25^+DN/DP胸腺細胞に限局して発現することが判り、定法に従ってノックアウトマウスを作製した。その結果、この限局した発現パターンにも関わらず、胸腺の分化には変化が生じなかった。しかし、HY特異的TCRトランスジェニックマウスとの交配では、胸腺の分化選択に役割を果たすことが示唆された。一方、末梢には発現しないと考えていたものの、活性化に伴って弱く発現することが判明し、Th1/Th2分化にも少なからず調節に関わることが示唆された。
(2)Pre-TCR複合体が常にlipid raftに存在して分化シグナルを導入しているとすると、ラフトに局在させたCD3分子のITAMを介して分化シグナルが入る可能性が考えられる。そこで、ラフト局在分子LATとCD3_ε鎖の細胞内領域とのキメラ分子を作製し、細胞に導入するとともに、トランスジェニックマウスを作製した。細胞トランスフェクタントの解析から、LAT-CD3_εキメラ分子は、ラフトに局在することが判明した。トランスジェニックマウスをRag欠損マウスと掛け合わせて、その胸腺分化を解析したところ、予想のように、DN細胞しか存在しないRag-KOマウスの胸腺にDP細胞が出現することが判明した。

Research Products

• [Publications] Itoh, K.: "Negative regulation of immune synapse formation by anchoring lipid raft to cytoskeleton through Cbp-EBP5O-ERM assembly"J.Immunol.. 168・2. 541-544 (2002)
• [Publications] Azeredo da Silveira, S.: "Complement activation selectively potentiates the pathogenicity of the IgG2b and IgG3 isotypes of a high affinity anti-erythrocyte autoantibody"J.Exp.Med.. 195・6. 665-672 (2002)
• [Publications] Ioan-Facsinay, A.: "Fc_γRI (CD64) contributes substantially to severity of arthritis, hypersensitivity responses and protection from bacterial infection"Immunity. 16・3. 391-402 (2002)
• [Publications] Yokosuka, T.: "Predominant role of T cell receptor α chain in forming preimmune TCR repertoire revealed by clonal TCR reconstitution system"J.Exp.Med.. 195・8. 991-1001 (2002)
• [Publications] Murata, Y.: "The conversion of redox status of peritoneal macrophages during pathological progression of spontaneous inflammatory bowl disease in Janus family tyrosine kinase 3-/-and IL-2R_γ-/-mice"Int.Immunol.. 14・6. 627-636 (2002)
• [Publications] Redegeld, F.A.: "Immunoglobulin free light chains elicit immediate hypersensitivity-like responses"Nat.Med.. 8・7. 694-701 (2002)
• [Publications] Snell, D.C: "Differential effects of reduced glycoprotein VI levels on activation of murine platelets by glycoprotein VI ligands"Biochem.J.. 368・Pt1. 293-300 (2002)
• [Publications] Tarzi, R.M.: "Nephrotoxic nephritis is mediated by Fc_γ receptors on circulating leukocytes and not intrinsic renal cells"Kidney Int.. 62・6. 2087-2096 (2002)
• [Publications] Matsumoto, K.: "Fc receptor-independent development of autoimmune glomerulonephritis in lupus-prone MRL lpr mice"Arthritis.Rheum.. 48・2. 486-494 (2003)
• [Publications] Yamasaki, S: "Gads/Grb2-mediated association with LAT is critical for the inhibitory function of Gab2 in T cells"Moll.Cell.Biol.. (in press).
• [Publications] Arase, N.: "IgE-mediated activation of NK cells through Fc_γRIII"J.Immunol.. (in press).
• [Publications] Saito, T.: "Negative feedback of T cell activation through inhibitory adaptors and co-stimulatory receptors"Immunol.Rev.. (in press).