新規トランスポーターによる抗癌剤の細胞内取り込みの解析:感受性増強のための新戦略

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470231
• Research Institution: Tohoku University
• Principal Investigator: 椎葉 健一 東北大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (90196345)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 溝井 賢幸 東北大学, 医学部・附属病院, 助手 (90271949) ; 阿部 高明 東北大学, 医学部・附属病院, 講師 (80292209)
• Keywords: トランスポーター / 有機アニオン / 抗癌剤 / 抗癌剤感受性 / 癌細胞

Research Abstract

1:ヒト癌細胞株のトランスポーター発現の解析
(1)Nothern blot解析にて、各種癌細胞株のLST-1,LST-2,RFC-1の発現を解析したところ、大腸癌、膵癌、胃癌、乳癌などの細胞株で高率にLST-2の発現が認められた。LST-1は、癌における発現はほとんど認められなかった。RFC-1は、種に血球系の癌と肺癌で発現が認められた。
(2)LST-2のmRNA発現強度をリアルタイムRT-PCRにて検討中である。
2:LST-1またはLST-2遺伝子導入による、抗癌剤取り込みおよび感受性変化の解析
(1)LST-1またはLST-2のcDNAを組み込んだ組み換えadenovirus(AdLST-1、AdLST-2)を作製した。
(2)乳癌細胞株MB231にAdLST-1またはAdLST-2を導入しLST-1・LST-2を強制発現させ、癌細胞におけるMTXの作用増強効果について検討した。LST-1・LST-2を強発現させたMB231では、MTT assayにてMTXに対する感受性が有意に増加した。またMTXの競合体BSPによりその感受性増強効果は抑制された。
(3)MTXの細胞内取り込みを^3H-MTXを用いて測定した。AdLST-1およびAdLST-2感染細胞は、no virus群、Adβ-gal(control virus)群に比べMOI5ではそれぞれ約5倍、MOI10ではそれぞれ約8倍増加した。
(4)AdLST-1、AdLST-2を感染させたMB231を用いて蛍光法による免疫染色を行ったところ、細胞膜及び核膜周囲の細胞質に強い発現が認められた。

Research Products

• [Publications] 阿部高明 ほか: "有機アニオントランスポーターoatp/LSTとその機能"蛋白質 核酸 酵素. 46・5. 612-620 (2001)
• [Publications] Fujiwara K., et al.: "Identification of thyroid hormone transporters in humans : different molecules are involved in a tissue-specific manner"Endocrinology. 142・5. 2005-2012 (2001)
• [Publications] Abe T., et al.: "LST-2, a human liver-specific organic anion transporter, determine methotrexate sensitivity in gastrointestinal cancers"Gastroenterology. 120. 1689-1699 (2001)