肉腫の転移能を規定する遺伝子変異とその制御-マウスRCT肉腫とヒト肉腫を用いて-

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470306
• Research Institution: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 金森 昌彦 富山医科薬科大学, 附属病院, 講師 (20204547)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 川口 誠 富山医科薬科大学, 医学部, 助手 (50204699) ; 大森 一生 富山医科薬科大学, 附属病院, 助手 (80303238)
• Keywords: fibrosarcoma / metastasis / gene analysis / sarcoma / genomic hybridization

Research Abstract

(1)マウス肉腫細胞の遺伝子解析について
C3Hマウスリンパ球および高・低肺転移能RCT肉腫の染色体マッピングの作成およびDNA抽出とCGH(Comparative genomic hybridizaion)法による解析を行った。マウス正常リンパ球および高・低肺転移能RCT肉腫を細胞培養し、まず細胞DNAをphenol法にて抽出し、電気泳動およびspechtro-photometerにてDNAの定量およびその切断を行った。その後CGHマイクロアレイ法を用いたhybridization法を行い、全染色体上のDNAの増強と低下についての解析を行った。その結果、高肺転移株ではadenylate cyclase 7,procollagenIII, alpha 1,cystain C precursorが増強され、thyloid hormone receptor-associated protein 100kDa, apoptosis inhibitor 1が低下していることが解った。
(2)ヒト肉腫細胞の遺伝子解析について
ヒト肉腫細胞は手術時材料より収集している途中である。全例、液体窒素により新鮮凍結を行い、系統的に保存するシステムを確立した。現在のところ肉腫原発巣25例・転移巣4例を収集した。CGH法による横紋筋肉腫の解析では12qと15qの遺伝子の増幅があり、アンプリコンと考えられた。この遺伝子変化はセントロメアプローブと該当遺伝子プローブを用いたFISH(Fluorescence in situ hybridization)法でも確認することができた。また手術時に得られたヒト腫瘍細胞の標本から培養を行い染色体の分析を行った。骨巨細胞腫、胞巣状軟部肉腫、滑膜肉腫などでの転座などの構造異常を確認した。今後さらにヒト肉腫細胞のDNA抽出とCGH法を用い、データを蓄積していく予定である。