疑核運動神経細胞の可塑性と再生に関する総合的研究

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470361
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 久 育男 京都府立医科大学, 医学部, 教授 (50181087)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 島田 剛敏 京都府立医科大学, 医学部, 助手 (30275226) ; 宇野 敏行 京都府立医科大学, 医学部, 講師 (70254349)
• Keywords: 疑核運動神経細胞 / 反回神経 / ヘルペスウイルス / アポトーシス関連遺伝子

Research Abstract

1.疑核運動神経細胞への中枢性入力の同定
内喉頭筋を支配している疑核運動神経細胞への中枢性入力に関して、シナプスを超えて感染を起こす性質を持つヘルペスウイルスを神経トレーサーとして用利用し、免疫組織化学的手法により組織学的に検討した。
マウスの輪状甲状筋にヘルペスウイルスを注入したモデルにおいて、灌流固定後全脳の連続切片を作成し、抗ヘルペスウイルス抗体を用い免疫染色を行い光学顕微鏡下に解析をおこなった。
両側の孤束核、前庭神経核、三叉神経脊髄路核、縫線核等にヘルペスウイルス陽性すなわち疑核に投射している神経細胞を認めた。また疑核では同側はもちろん対側にも陽性細胞を確認した。これは中枢から両側性に疑核への投射経路が存在することを示唆する所見と考えている。
輪状甲状筋以外の内喉頭筋の支配神経である反回神経にヘルペスウイルスを局所注入したモデルに関しても現在、同様の手法により検討中である。
2.反回神経損傷時における疑核運動神経細胞におけるアポトーシス関連遺伝子の出現
反回神経損傷モデルの作製:SDラットの両側内喉頭筋に神経トレーサーであるDiIを注入し、逆行性に疑核運動神経細胞を標識する。標識後に右反回神経を切断し切断モデルとした。
疑核標識運動神経細胞の摘出:反回神経切断後1,2,4,7,14日後に脳幹を取り出し直ちに凍結し、クライオスタットを用いスライスする。DiI陽性疑核運動神経細胞を含むスライスから蛍光実体顕微鏡下にトリミングを行い、標識細胞を含んだ約1mm角の切片を作製した。
反回神経由来の疑核運動神経細胞を含む細胞群からの全cDNAの作製:この切片からStratagene total RNA microprep kitおよびBRL SUPERSCRIPT II Preamplification Systemを用い全RNA抽出およびcDNAを作製し、反回神経切断側、非切断側におけるアポトーシス関連遺伝子の発現変動について解析中である。

Research Products

• [Publications] Uno T, SHOGAKI K, HISA Y et al.: "Growth associated protein-43 mRNA expression in nucleus ambiguous motoneurons after recurrent laryngeal nerve injury in the rat"Acta Otolaryngol. 123・2. 292-296 (2003)