2001 Fiscal Year Annual Research Report
レンチウイルスベクターを用いた遺伝性角膜疾患に対する根治的遺伝子治療の開発
Project/Area Number |
13470367
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Research Institution | Osaka University |
Principal Investigator |
西田 幸二 大阪大学, 医学系研究科, 助手 (40244610)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
田野 保雄 大阪大学, 医学系研究科, 教授 (80093433)
渡辺 仁 大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (60252673)
山本 修士 大阪大学, 医学系研究科, 講師 (80294065)
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Keywords | レンチウイルスベクター / 角膜発現特異的プロモーター / 斑状角膜ジストロフィ / トランスジェニックマウス / eGFP / 遺伝子導入 / 培養角膜上皮シート / 角膜内皮 |
Research Abstract |
遺伝性角膜疾患に対する根治的遺伝子治療の開発のため、まず、角膜発現特異的プロモーターの開発に取り組んだ。我々がクローニングした斑状角膜ジストロフィの責任遺伝子CHST6のプロモーター部分には角膜特異的転写を促進するエンハンサー部位が存在していたので、このエンハンサー部位とコアプロモーターを連結しGFPを下流につなげたコンストラクトを作製した。また、このエンハンサー部位を含むプロモーター部位とGFPを下流につなげたコンストラクトを作製した。現在は、これら2つのコンストラクトを用いたトランスジェニックマウスを作製中である。このマウスを解析して2つのプロモーターの各組織における発現パターンを検討し、角膜発現特異的プロモーターとして利用可能かを検討する。つぎに、eGFPを導入遺伝子としたレンチウイルスベクターを作製し、ヒト培養角膜上皮細胞シートに遺伝子導入を行った。その結果、eGFPが培養角膜上皮シート全層に発現していることが確認され、培養角膜上皮細胞移植を利用した遺伝子治療の臨床応用の可能性を証明することができた。またヒトex vivo角膜内皮にレンチウイルスベクターでeGFPを導入遺伝子としたところ、角膜内皮細胞に効率よく遺伝子導入することができた。全層角膜移植を利用した角膜内皮疾患に対する遺伝子治療の臨床応用の可能性も証明することができた。
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Research Products
(2 results)
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[Publications] Akama TO, Nakayama J, Nishida K, et al.: "Human corneal GlcNAc 6-O sulfotransferase and mouse intestinal GlcNAc 6-O sulfotransferase both produce keratan sulfate"J Biol Chem. 276. 16271-16278 (2001)
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[Publications] Dota A, Nishida K, et al.: "An Expression Profile of Active Genes in Human Conjunctival Epithelium"Exp Eye Res. 72. 235-241 (2001)