独自に開発したDNAチップを用いた癌と宿主の放射線照射による遺伝子学的変化の検討

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13470441
• Research Institution: Tokyo Dental College
• Principal Investigator: 野間 弘康 東京歯科大学, 歯学部, 教授 (40085791)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 鵜澤 一弘 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教授 (30302558) ; 柴原 孝彦 東京歯科大学, 歯学部, 助教授 (50178919) ; 丹沢 秀樹 千葉大学, 大学院・医学研究院, 教授 (50236775) ; 関 直彦 千葉大学, 大学院・医学研究院, 助教授
• Keywords: cDNAマイクロアレイ / 口腔癌 / 遺伝子発現

Research Abstract

独自に開発を行ったDNAチップを用いて以下の実験を行った。
1)口腔粘膜上皮(正常部および癌部)からRNAを抽出し、口腔癌特異的cDNAライブラリーを作成した。
そのライブラリーから選別した2304個のクローンについて、PCRで増幅し、スライドグラス上にスポットして口腔癌特異的DNAチップを作成した。
2)放射線照射後の口腔癌組織10症例に対して、マイクロアレイ解析を行った。
3)マイクロアレイ解析で発現の減弱・増強の認められた遺伝子群について、RT-PCR法を行ってマイクロアレイ解析のconfirm実験を行った。
以上の実験より、以下の結果が得られた。
1)マイクロアレイ解析の結果、約50から200の遺伝子に、発現の減弱あるいは増強が認められた。その主なものは、9番染色体上の未知遺伝子、2番染色体上の未知遺伝子、Clorf10、JTV-1、translation initiation factorなどであった。
現在、同定された遺伝子群についてRT-PCR法などを用いて、confirm実験を行っている。今後口腔癌由来細胞株等を用いて、X線照射量を変化させて、照射X線量の相違による遺伝子発現増強・減弱について観察し、放射線照射におけるDNAの受ける影響について、検討していく予定である。