2001 Fiscal Year Annual Research Report
膜4回貫通型蛋白質CD9とそのファミリー分子の機能解析
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13480238
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
目加田 英輔 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (20135742)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮戸 健二 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (60324844)
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| Keywords | TM4ファミリー / CD9 / ノックアウトマウス / 線虫 / 受精 / RNAi |
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| Research Abstract |
膜4回貫通型(TM4ファミリー)の蛋白質CD9は、インテグリンや膜結合型細胞増殖因子HB-EGFなど、種々の膜蛋白質と細胞膜上で複合体を形成し、細胞増殖、分化、受精、創傷治癒、免疫、止血、癌転移、ウイルス感染などの様々な生命現象に関与していると考えられている分子である。本研究は、CD9とそのファミリー分子の構造と機能の関係を分子生物学的手法で解析し、その生理的役割を明らかにすることを目的とする。今年は以下のような成果を得た。
1)膜融合現象におけるCD9の役割。
精子との融合ができないCD9欠損マウス未受精卵にCD9のmRNAを注入し、融合能のレスキューを試み、これに成功した。そこで、CD9のミュータントを多数作成し、この系を用いて、融合に必要な領域の決定を現在行っている。
2)線虫を用いたTM4ファミリーの機能解析
TM4ファミリー分子は種類が多く、それらをノックアウトを含めてマウスで解析していくのは、動物の飼育スペース、労力、予算的に困難である。一方、線虫には少なくとも9種類のTM4ファミリー分子が存在し、線虫の場合、ミュータントの分離、そのミュータントの表現型を増強したり抑制する別の遺伝子を分離する、などの手法が適応できるため、TM4ファミリーの機能解析を遺伝学的に押し進めることが可能となる。このような観点からCD9と比較的構造が類似している9種類のTM4ファミリー分子について、RNAiによる発言抑制を行い、その表現型を解析した。その結果、CD151とホモロジーが高い線虫TM4が抑制されると、線虫の表皮が剥離する、"brister"様の異常を示すことが明らかになった。この結果より、TM4と細胞基質間接着機能との関連が示唆された。
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[Publications] Hasuwa, H., etc: "CD9 amino acids critical for upregulation of diphtheria toxin binding"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 289. 782-790 (2001)
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[Publications] Hirata, M., etc: "Identification of serum factor unducing ectodomain shedding of proHB-EGF and studies of noncleavable mutants of pro HB-EGF"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 283. 915-922 (2001)
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[Publications] Umata, T., etc: "A dual signaling cascade that regulates the ectodomain shedding of HB-EGF"J. Biol. Chem.. 276. 30475-30482 (2001)
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[Publications] Saito, M., etc: "Diphtheria toxin receptor-mediated conditional and targeted cell ablation In transgenic mice"Nat. Biotechnol.. 19. 746-750 (2001)
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[Publications] Takahashi, T., etc: "Extension of juxtamembrane domain of diphtheria toxin receptor arrests Translocation of diphtheria toxin fragment A into cytosol"Biochem. Biophys. Res.Commun.. 281. 690-696 (2001)
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[Publications] Miyamoto, S., etc: "Loss of motility-related protein 1 (MRP1/CD9) and integrin alpha3 Expression in endometrial cancers"Cancer. 92. 542-548 (2001)
