トリパノソーマ病特異的診断法の開発および野外材料を用いた実用評価

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13556048
• Research Institution: Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
• Principal Investigator: 井上 昇 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 講師 (10271751)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 玄 学南 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 助教授 (10292096) ; 田仲 哲也 北海道大学, 大学院・農学研究科, 助手 (00322842) ; 横山 直明 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 講師 (80301802) ; 長澤 秀行 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (60172524) ; 藤崎 幸蔵 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (00292095)
• Keywords: トリパノソーマ / 原虫 / 診断 / 血清 / ELISA / 組換タンパク質

Research Abstract

本研究計画第1年度はトリパノソーマ病特異的診断法開発に有用であるトリパノソーマ特異的遺伝子を検索し,クローニングすることを目標とした.また,クローニングした遺伝子は組換えトリパノソーマ抗原として大腸菌または昆虫細胞を用いて発現し,その抗原性について血清診断に応用可能か否か検討した。
1.トリパノソーマ特異的抗原遺伝子のクローニング:
(1)トリパノソーマ(T. congolense)cDNAライブラリーを作製した。
(2)10種のトリパノソーマ特異的単クローン抗体(奨励研究(A)、平成12-13年度、課題番号12760208にて作製済み)によるイムノスクリーニングによって,POサブユニットタンパク質、ミトコンドリアHSP70および新規抗原(p74と呼ぶ)をコードする遺伝子をクローニングした。
(3)それぞれの特異抗原遺伝子コード領域近傍のゲノム遺伝子配列は現在クローニングし,配列を決定しているところであり、完了すればこれらの遺伝子の全転写ユニットが明らかとなる。
2.組換えトリパノソーマ抗原の作製:
(1)クローニングしたトリパノソーマ特異抗原遺伝子の内、POおよびp74の大腸菌発現プラスミドベクターを構築した。POについてはpRSET vectorを用いて予想通りの分子量および抗原性を有する組換POタンパク質を作製できた。一方p74はpRSET vectorの発現系では遺伝子配列に異常が認められないにもかかわらず、組換p74蛋白の発現ができなかった。現在、その原因を追求すると同時に、別の大腸菌発現ベクターおよびバキュロウイルス発現ベクターを用いて組換体を構築している。
3.作製した組替タンパク質の抗原性に関する検討については現在遂行中である。

Research Products

• [Publications] Inoue, N.: "Characterization of phagocytic hemocytes in Ornithodoros moubata(Acari: Ixodidae)"Journal of Medical Entomology. 38・4. 514-519 (2001)
• [Publications] Nishikawa, Y.: "Protective efficacy of vaccination by recombinant vaccinia virus against Neospora caninum infection"Vaccine. 19. 1381-1390 (2001)
• [Publications] Fukumoto, S.: "Identification and expression of a 50-kilodalton surface antigen of Babesia gibsoni and evaluation of its diagnostic potential in an enzyme-linked immunosorbent assay"Journal of Clinical Microbiology. 39・7. 2603-2609 (2001)
• [Publications] Nishikawa, Y.: "In the absence of endogenous gamma interferon, mice acutely infected with Neospora caninum succumb to a lethal immune response characterized by inactivation of peritoneal macrophages"Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 8・4. 811-817 (2001)
• [Publications] Xuan, X.: "Diagnosis of equine piroplasmosis in Brazil by serodiagnostic methods with recombinant antigens"The Journal of Veterinary Medical Science. 63・10. 1159-1160 (2001)
• [Publications] Nishisaka, M.: "Characterization of the gene encoding a protective antigen from Babesia microti identified it as η subunit of chaperonin containing T-complex protein 1"International Journal for Parasitology. 31・14. 1673-1679 (2001)