2001 Fiscal Year Annual Research Report
プリン代謝酵素欠損癌診断法の確立と臨床応用に関する研究
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13557226
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| Research Institution | Mie University |
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Principal Investigator |
白石 泰三 三重大学, 医学部, 教授 (30162762)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高尾 仁ニ 三重大学, 医学部, 助手 (30263007)
駒田 美弘 三重大学, 医学部, 教授 (80186791)
登 勉 三重大学, 医学部, 教授 (60106995)
山森 俊治 (株)三菱化学BCL, 遺伝子解析部, 部長
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| Keywords | MTAP / promoterのメチル化 / 非小細胞肺癌 / 定量的PCR法 / モノクロナール抗体 / 抗癌剤感受性試験 / Methylthioadenosine |
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| Research Abstract |
プリン代謝酵素Methylthioadenoisine phosophorylase(MTAP)欠損はT-ALL、非小細胞肺癌、脳腫瘍などの癌で報告されている。遺伝子欠失が原因である場合が殆どであるが、MTAP遺伝子の近傍に存在するp16はメチル化による発現制御を受けていることが知られている。我々は、MTAP promoterのメチル化によるMTAP欠損細胞株を経験した。従って、これまでに開発した定量的PCR法によるMTAP遺伝子欠失診断では不十分であると予想され、解析を行った。また、この欠損を利用し選択的癌化学療法の可能性を追求した。
モノクロナール抗体;免疫組織染色によるMTAPタンパク質の検出のために抗ヒトMTAP抗体の作製を開始した。大腸菌で発現したヒトMTAPタンパク質を用いてマウスを免疫した。血清中の抗MTAP抗体価をELISA法で測定し、高抗体価を示すマウスを得た。次いで、モノクローナル抗体の作製を試み、5クローンが高抗体価を示すことを確認した。
腫瘍組織の解析;原発性肺癌手術症例38例より腫瘍検体を得た。(1)抗癌剤感受性試験に用いる通常の培地ではMTXの制癌作用が現れにくいことが判明したため、培地を葉酸含有量が少ないRPMI-1640培地に変更。(2)real-time PCR法によるMTAP遺伝子変異検索は22例を測定、3例に遺伝子変異を確認した。MTAP正常例でMTXに感受性を認めた例は、Methylthioadenosine(MTA)添加によりMTX感受性が低下することより、プリン新生合成阻害治療時のMTAによるMTAP正常細胞のsalvageの可能性が示唆された。
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