体液性生体試料からの癌の遺伝子検査パラダイムの確立と検証

2003 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13557228
• Research Institution: Nagasaki University
• Principal Investigator: 上平 憲 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 教授 (80108290)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 引地 一昌 (株)エスアールエス, 遺伝子検査染色体解析センター, 室長 ; 平潟 洋一 長崎大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (50238341) ; 中越 亨 長崎大学, 大学院・医歯薬学総合研究科, 助教授 (40188917)
• Keywords: plasma DNA / survivin / k-ras / real-time PCR / mutation

Research Abstract

最終年度は、体液性生体試料の代表であるplasmaを用いて下記の検討を行った。(1)担がん患者のplasma nucleic acid(NA)を定量し、plasma DNAやRNAが検査対象になりうるかの検討、(2)survivin(SVV)mRNAの検出定量とk-ras変異率の検出、(3)SVV proteinの定量(ELISA)とCEAの測定などを行い、がんの存在診断やがんの特性のscreeningにこれらの生体試料が有用か否かの検討をした。
対象は、悪性腫瘍80例(肺癌32例、大腸癌14例、胆・膵癌12例、食道癌5例、胃癌4例、肝癌3例、乳癌5例,他5例)、健常者31例である。plasma DNA dose(Pico green法)は、担癌患者のstage I,II,III,IV間で各々11.2,8.0,6.0,10.3ng/ml(median)と差がなく、RNAを主体とするplasma NA dose(Ribo green法)は各々47.6,49.2、57.5、60.3ng/mlとstageの進行ごとに増加傾向にあった。尚,非担がん健常者の値は54.4pg/mlであった。また、このplasma NAが検査に適するかの質的評価はLight Cycler Real Time PCRでβ-globin(DNA)、GAPDH(RNA)、SVVを定量すると各々1.92x10#1 copies、6.1x10#1 copies、undetectable/5μl plasmであった。このような試料にて、k-ras codon 12変異3.8%(3/80),codon13変異3.8%,codon12or13変異7.5%およびSVV mRNA(+)5%(4/80cases)の頻度で検出された。一方、血清中のSVV蛋白レベルは、担癌患者の各stage別で71.6(median,25-75% values of 29.0-161.8),40.7(30.5-133.5),76.9(37.8-136.0),58.4(40.7-135.2)であった。ROC曲線から得られた血漿SVV蛋白レベルの値130pg/mlをCOVとして、各区stageにおけるがんの存在診断率はstage I 30%(6/20),II28%(5/18),III30%(6/20),IV27%(6/22)であった。尚、既存の血清CEAと血清SVV蛋白レベルとの間には相関はなく(r=0.125),相互に排他的で各々の感度は27.3%、28.8%で何れかが陽性の場合は48.8%となった。

Research Products

• [Publications] Nakagoe T, Kamihira S, et al.: "Increased serum levels of interleukin-6 in malnourished patients with colorectal cancer"Cancer Lett.. 202(1). 109-115 (2003)
• [Publications] Nakagoe T, Kamihira S, et al.: "Minilaparotomy may be independently associated with reduction in inflammatory responses after resection for colorectal cancer"Eur Surg Res.. 35(6). 477-485 (2003)
• [Publications] Nakagoe T, Kamihira S, et al.: "The relationship between circulating interleukin-6 and carcinoembryonic antigen in patients with colorectal cancer"Anticancer Res.. 23(4). 3561-3564 (2003)
• [Publications] Isomoto H, Kamihira S, et al.: "A case of mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma of the ampulla of Vater : successful treatment with radiation therapy"Eur J Gastroenterol Hepatol.. 15(9). 1037-1041 (2003)
• [Publications] Kawabata S, Kamihira S, et al.: "Expression and functional analyses of breast cancer resistance protein in lung cancer"Clin Cancer Res.. 9(8). 3052-3057 (2003)
• [Publications] Takasaki Y, Kamihira S, et al.: "Interruption of p16 gene expression in adult T-cell leukaemia/lymphoma : clinical correlation"Br J Haematol.. 122(2). 253-259 (2003)