イネインポーティン-α結合タンパク質の機能解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13640643
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 岩崎 俊介 新潟大学, 理学部, 助教授 (00201947)
• Keywords: 核タンパク質 / インポーティンα結合タンパク質 / 光応答遺伝子発現 / タンパク質間相互作用 / イネ / TPR配列 / 核局在化シグナル

Research Abstract

本研究の目的は、すでにcDNAが単離されている、発現が光照射によって低下する核輸送複合体成分イネインポーティンα1a(IMPα1a)が結合するタンパク質IABP4の機能を明らかにすることによって、光環境応答に関わる可能性のある新奇なタンパク質因子を同定することである。当初の計画の実施状況とその成果は以下の通りである.
1.核局在性の検証:IABP4は推定分子量122Kの新奇なタンパク質であるが、C末端部分に核局在化シグナル様配列を含み、実際に、大腸菌で発現させたC末端ポリペプチド断片がIMPα1aと複合体を形成することがわかっている。今後細胞内局在性を調べるための間接蛍光抗体法やウェスタンブロット法に利用する目的で、IABP4に対するウサギポリクローナル抗体を作製した。細胞内でIABP4と複合体形成している他のタンパク質を同定するための免疫沈降法にも利用する予定である.
2.発現様式の解析:予備的な半定量的RT-PCR実験ですでに、黄化芽生えで白色光照射によって発現が低下することを示す結果が得られているが、この結果の再現性の確認や他の条件下での発現解析には手をつけられなかった。
3.植物体における機能の解析:シロイヌナズナにも2番染色体上にIABP4と高い相同性を示す遺伝子が存在する。これら植物のタンパク質は、マウスのリン酸化核タンパク質TSPと相同性を示すが、TSPの機能を決めていると思われるC末端部分での相同性が低く、マウスのTSPと同じ機能を持つとは考えにくい。現在は、機能を探る手掛かりとなるT-DNA挿入変異株をかずさDNA研究所保有のシロイヌナズナタグラインの中からスクリーニングするために、遺伝子特異的プライマを合成した段階である.