唾液腺の形態形成における分枝形成特異的遺伝子の解析

2001 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13640660
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 野川 宏幸 千葉大学, 理学部, 助教授 (40143250)
• Keywords: マウス胚 / 唾液腺 / 分枝形成 / 上皮単独培養 / 成長因子 / 分枝特異的遺伝子 / サブトラクションスクリーニング

Research Abstract

本研究はマウス胚唾液腺の分枝形成を制御している遺伝子を探索し,その役割から分枝形成機構を明らかにすることを目的としている。平成13年度は分枝形成時に上皮で特異的に発現している遺伝子のスクリーニングをおこなった。
分枝している唾液腺上皮と分枝していない唾液腺上皮との間で発現量に差のある遺伝子を探索するため,単離した唾液腺上皮を基底膜様物質マトリゲルで覆い,一方には培養液にEGFと血清を加えて盛んに分枝させ,他方にはFGF7を加えて分枝をさせずに伸長させた。両者を各100個集め,トータルRNAを抽出し,cDNAを合成し,クローンテック社のキットを用いて両者の間でサブトラクションをおこなった。得られたサブトラクション済み産物をクローニングし,約300クローンの中からFGF7下よりEGF下でより多く発現しているものをドットブロットハイブリダイゼーションにより選択した。選択したクローンのシークエンスをおこない,その部分配列からホモロジー検索をおこなった結果,10個の分枝特異的遺伝子の候補が同定された。
現在,これらの遺伝子が分枝している上皮で特異的に発現していることを確認する作業をRT-PCR法によりおこなっている。今後は,特異的であることが確認された遺伝子に対するDIGラベルプローブを作成し,インサイチュウハイブリダイゼーションをおこない,分枝と相関した発現の局在が観察されるかを調べる予定である。