2001 Fiscal Year Annual Research Report
糸状菌のβ-1,6-グルカナーゼの構造と機能に関する研究
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13660077
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
中島 佑 東北大学, 大学院・農学研究科, 教授 (20091720)
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| Keywords | β-グルカナーゼ / β-1,6-グルカナーゼ遺伝子 / Neurosopora rassa / 糸状菌細胞壁 / β-グルカン |
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| Research Abstract |
アカパンカビ(Neurospora crassa, IFO6068)のエンド-1,6-β-D-グルカナーゼを精製し、遺伝子(neg1)をクローニングし、その塩基配列及びタンパクの一次構造を明らかにした、さらにneg1産物の大腸菌での発現に成功した。
得られたエンド-1,6β-D-グルカナーゼ遺伝子は、全長1443bpからなり、内部にイントロンを含まないことが明らかにされた。本遺伝子は17アミノ酸残基のシグナルペプチドと463アミノ酸残基の成熟タンパク質をコードしていた。,遺伝子産物(Neg1)を、His-tagを付加した状態で大腸菌で発現させ精製したのち、1,6βD-グルカナーゼ活性を確認した。リコンピナント酵素の分子サイズは約50kDa、一方遺伝子からの推定分子サイズは49,894Daであった。本遺伝子の塩基配列と相同性を示す、酵母、糸状菌由来の1,6-β-D-グルカナーゼ遺伝子は見出されていない。
N.crassaのゲノムデータベースに対する相同検索により、この遺伝子が第4染色体上に存在することが明らかとなった。
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[Publications] 小山誠司 他: "Cloning and expression of an endo-1.6-β-D-glucanase gene (negl) from Nerospora crassa"Bisci. Biotechnol. Biochem.,. 66,(in press). (2002)
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[Publications] 前田 浩 他: "Alkaline-resistant model of subtilisin ALPl, a noel alkaline subtilisin"J. Biochem.,. 129. 675-682 (2001)
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[Publications] 鈴木哉子 他: "Characterizaton of recombinant yeast exo-β1.3-glucanase(Exglp) expressed in"Biosci. Biotechnol. Biochem.,. 65. 1310-1314 (2001)
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[Publications] 前田 浩 他: "Identification of N-terminal autodigestion target site in subtilisin ALPl"Biosci. Biotechnol. Biochem.,. 65. 1255-1257 (2001)
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[Publications] 吉田 孝 他: "Filamentous fungus Aspergillus oryzae has two types of α-1.2-mannosidases, one of which is a microsomal enzyme that removes a single mannose residue from Man9GlcNAc2"Glycoconjugate journal. 17. 745-748 (2000)
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[Publications] 中村 志芳 他: "Identification of copper ligands in Aspergollus oryzae tyrosinase by site-directed mutagenesis"Biochem. J.,. 350. 534-545 (2000)
