卵胞と肝臓による家禽卵黄膜精子レセプターの形成に及ぼすステロイドホルモンの役割

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13660284
• Research Institution: Shizuoka University
• Principal Investigator: 森 誠 静岡大学, 農学部, 教授 (90143411)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 笹浪 知宏 静岡大学, 農学部, 助手 (80322139)
• Keywords: ウズラ / 卵子 / 卵黄膜 / 肝臓 / ZP1 / エストロゲン / 遺伝子 / PCR

Research Abstract

ウズラの卵黄膜内層は35KDaと175KDaの2種類の糖タンパクで構成されており、このうち35KDaのタンパクは卵胞の顆粒膜細胞によって合成分泌されていることがわかっている。最近ニワトリで、175KDaの糖タンパクが哺乳類や魚類のZP1と相同性が高いことが判明した。そこで本研究では、ウズラZP1遺伝子に着目し、合成エストロゲンによる遺伝子発現の誘導をRT-PCR法によって測定するシステムを開発した。ウズラZP1の塩基配列を決定し、そのORFから読んだアミノ酸配列を他の動物種のZP1およびZPBと比較した結果、全アミノ酸934残基のうちN末端から128〜571番目の配列は哺乳類のZP1またはZPBにはない特徴的な繰り返し配列を含んでおり、そのためアミノ酸配列の相同性は哺乳類に対しては40%以下であったが、ニワトリZP1とは87%であった。そこでこの繰り返し配列をさけるようにPCR用のブライマーを設計し、成熟および3週令未成熟の雌雄ウズラの肝臓から得たRNAを用いてRT-PCRをおこなった。その結果、成熟雌ウズラの肝臓でのみ880baseの増幅産物が検出された。エストロゲンによるZP1遺伝子発現の誘導を検討するため、成熟および未成熟の雌雄ウズラにジエチルスチルベステロールを2日間投与し、肝臓のmRNA量をRT-PCR法によって測定した。その結果、ジエチルスチルベステロールの投与によって成熟雄および未成熟雌雄ウズラで増幅産物が検出できることがわかった。産卵中の成熟雌ウズラにジエチルスチルベステロールを投与し、産卵された受精卵から孵化したヒナの肝臓のZP1の遺伝子発現を測定した。その結果、母親に投与するとヒナの肝臓で増幅産物が検出されることがわかった。

Research Products

• [Publications] 森 誠: "受精における卵黄膜の役割"日本家禽学会誌. 39(J2). J121-J129 (2002)
• [Publications] Tomohiro Sasanami: "Secretion of egg envelope protein ZPC after C-terminal proteolytic processing in quail granulosa cells"European Journal of Biochemistry. 269(8). 2223-2231 (2002)
• [Publications] Tomohiro Sasanami: "Asparagine-linked oligosaccarides-independent secretion of egg envelope glycoprotein ZPC of the Japanese quail (Coturnix japonica)"Comparative Biochemistry and Physiology. 134. 631-638 (2003)
• [Publications] Tomohiro Sasanami: "Expression of Perivitelline Membrane Glycoprotein ZP1 in the Liver of Japanese Quail after in vivo Treatment with Diethylstilbestrol"J.Steroid Biochemistry & Molecular Biology. 134(印刷中). (2003)
• [Publications] Tomohiro Sasanami: "Effect of Follicle-Stimulating Hormone on ZPC Protein Secretion by Quail Granulosa Layer"Animal Science Journal. 74(印刷中). (2003)
• [Publications] Tomohiro Sasanami: "Carboxy-Terminal Proteolytic Processing at a Consensus Furin Cleavage Site is a Prerequisite Event for Quail ZPC Secretion"Biology of Reproduction. 68(印刷中). (2003)