2002 Fiscal Year Annual Research Report

TNFレセプターファミリーを介するNF-_κB活性化のメカニズムの解析

Research Project

Project/Area Number	13670323
Research Institution	Juntendo University
Principal Investigator	中野裕康順天堂大学, 医学部, 講師 (70276476)
Keywords	NF-κB / p65 / ノックアウトマウス / TNF / アポトーシス / IL-6 / リン酸化 / IκB
Research Abstract	昨年までの研究によりNF-κB p65サブユニットにより細胞死抑制効果およびインターロイキン6の産生には、p65のレルホモロジードメイン内に存在する276番目のセリン残基のリン酸化が必須であることを我々は明らかにした。そこで本年度は、そのリン酸化がどのようなメカニズムでp65による生理学的活性に影響を及ぼしているかを検討した。まず野性型p65および276番目のセリン残基をアラニンに置換したp65(S276A)を遺伝子導入したp65-/-MEFをTNF刺激後に、核分画を調整し、NF-κBの結合配列を有するオリゴヌクレオチドを用いてゲルシフトアッセイを行ったところ、p65の核移行およびDNAへの結合に両者では差は認められなかった。これらの結果より、セリン276のリン酸化はp65の核移行やDNA結合には影響せず、おそらくその他のメカニズムを介してp65を介する転写の活性化に必須の役割を果たしていると考えられた。また、セリン276をリン酸化するキナーゼを同定するために、これまでにNF-κBの転写の活性化に関与が示唆されているGSK3-β,T2K/NAK/TBK1,AktおよびPKAcなどを一過性に発現させ、免疫沈降後にGST-p65(1-305)を基質としたインビトロキナーゼを行ったが、いずれのキナーゼもGST-p65(1-305)に対するリン酸化能は認められなかった。さらに既にセリン536をリン酸化することが示されているIKKβおよびIKKαのリコンビナントタンパクを用いて同様の実験を行ったが、やはりGST-p65(1-305)に対するリン酸化能は認められなかった。しかし、種々のキナーゼインヒビターを用いた実験からは、Akt, ERKやp38MAPKのインヒビターであるLY294002,PD98059,SB203580処理によりTNFあるいはIL-1刺激によるIL-6産生の抑制が認められることより、これらのキナーゼの下流にS276kinaseが存在する可能性もあり、今後検討していく予定である。

Research Products
(7 results)

All Other

All Publications (7 results)

[Publications] Okazaki, T.: "Phosphorylation of serine 276 is essential for p65 NF-κB subunit-dependent cellular responses"Biochem Biophys Res Commun. 300. 807-812 (2003)
[Publications] Hur, G.-M., et al.: "The Death Domain Kinase RIP plays an Essential Role in DNA Damage-induced NF-κB Activation"Genes & Development. (in press). (2003)
[Publications] Nakayama, M., et al.: "Multiple pathways of TWEAK-induced cell death"J Immunol. 168. 734-743 (2002)
[Publications] Harada, N., et al.: "Pro-inflammatory effect of TWEAK/Fn14 interaction on human umbilical vein endothelial cells"Biochem Biophys Res Commun. 299. 488-493 (2002)
[Publications] Saitoh, T., et al.: "Lymphotoxin-β receptor mediates NEMO-independent NF-κB activation"FEBS lett. 532. 45-51 (2002)
[Publications] Sasazuki, T., et al.: "Identification of a novel transcriptional activator, BSAC, by a functional cloning to inhibit tumor necrosis factor-induced cell death"J Biol Chem. 277. 28853-28860 (2002)
[Publications] Kanazawa, K., et al.: "TRAF5 functions in both RANKL-and TNFα-induced osteoclastogenesis"J Bone Mineral Res.. (in press). (2003)

2002 Fiscal Year Annual Research Report

TNFレセプターファミリーを介するNF-_κB活性化のメカニズムの解析

Principal Investigator

中野 裕康 順天堂大学, 医学部, 講師 (70276476)

Research Products

[Publications] Okazaki, T.: "Phosphorylation of serine 276 is essential for p65 NF-κB subunit-dependent cellular responses"Biochem Biophys Res Commun. 300. 807-812 (2003)

[Publications] Hur, G.-M., et al.: "The Death Domain Kinase RIP plays an Essential Role in DNA Damage-induced NF-κB Activation"Genes & Development. (in press). (2003)

[Publications] Nakayama, M., et al.: "Multiple pathways of TWEAK-induced cell death"J Immunol. 168. 734-743 (2002)

[Publications] Harada, N., et al.: "Pro-inflammatory effect of TWEAK/Fn14 interaction on human umbilical vein endothelial cells"Biochem Biophys Res Commun. 299. 488-493 (2002)

[Publications] Saitoh, T., et al.: "Lymphotoxin-β receptor mediates NEMO-independent NF-κB activation"FEBS lett. 532. 45-51 (2002)

[Publications] Sasazuki, T., et al.: "Identification of a novel transcriptional activator, BSAC, by a functional cloning to inhibit tumor necrosis factor-induced cell death"J Biol Chem. 277. 28853-28860 (2002)

[Publications] Kanazawa, K., et al.: "TRAF5 functions in both RANKL-and TNFα-induced osteoclastogenesis"J Bone Mineral Res.. (in press). (2003)

中野裕康順天堂大学, 医学部, 講師 (70276476)