プロテアソーム-PCNA複合体の構成蛋白とその免疫応答の解析

2002 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 13670476
• Research Institution: Juntendo University
• Principal Investigator: 高崎 芳成 順天堂大学, 医学部, 助教授 (80154772)
• Keywords: プロテアソーム / PA28γ / PCNA / 自己免疫 / 自己抗体

Research Abstract

抗PCNAマウスモノクローナル抗体、TOB7,TO17およびTO30を用いたアフィニティーカラムを作成し、ウサギ胸腺アセトンパウダーPBS抽出液を抗原源としてPCNAが他の蛋白と結合したPCNA複合体を精製した。この精製PCNA複合体の特異性を抗PCNAモノクローナル抗体に加え、RPA、DNA helicase II, p21,CDK4,CDK5、などに対するモノクローナル抗体、さらに20Sプロテアソームαおよびβ subunit, PA700 ATPase subunit, p52 subunitなどのモノクローナル抗体を用いた免疫ブロット法(IB)で確認後、自験全身性性エリテマトーデス患者血清のこれら一連の蛋白結合体に対する免疫応答について解析を加えた。その結果、115例中33%の患者血清がPCNA蛋白複合体中の少なくとも一つの蛋白と反応し、大部分の血清が複数の蛋白と同時に反応する傾向が確認された。さらに、同一患者の血清の反応性を経時的に観察すると、病態の活動性と相関してPCNA複合体の各成分に対する免疫応答が広がっていく現象が認められた。この事実は、抗原提示がPCNA複合体に対する免疫応答の誘導に重要な役割を有し、SLE患者では細胞増殖に関与する自己抗原に対し、多彩な自己抗体が出現していることが確認された(Arthritis Rheum,46:2946-56,2002)。これらの対応抗原の解析はSLEにおける免疫応答と共に細胞増殖のメカニズムの解析に重要と思われ、現在その対応抗原の解析を2D-ゲル電気泳動および免疫ブロット法さらにELISAにて行っている。

Research Products

• [Publications] Takasaki Y, Ando S, Matsumoto K, et al.: "Activated peripheral blood mononuclear cells detected in lupus patients using cDNA coding for proliferating cell nuclear antigen"Modern Rheumatol. 12. 239-245 (2002)
• [Publications] Kogure T, Takasaki Y, Takeuchi K, et al.: "Autoimmune responses to proliferating cell nuclear antigen multiprotein complexes involved in cell proliferation are strongly associated with their structure and biologic function in patients with systemic lupus erythematosus"Arthritis Rheum. 46. 2946-2956 (2002)
• [Publications] Murakami A, Kojima K, Imamura K, Takasaki Y: "A New Conformational Epitope Generated by the Binding of Recombinant 70-kd Protein and U1 RNA to Anti-U1 RNP Autoantibodies in Sera From Patients With Mixed Connective Tissue Disease"Arthritis Rheum. 46. 3273-3282 (2002)
• [Publications] Takasaki Y, Kameda K, Yamada H, et al.: "Autoimmune response to glycelaldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) is strongly associated with its cellular function in lupu patients"autoantigens, autoantibodies, autoimmunity. 3. 93-115 (2002)
• [Publications] Hirakawa K, Takasaki Y, Takeuchi K, et al.: "Characterization of novel antibody against sequence-specific RNA by a random RNA selection in patients with Sjogren's syndrome"J Rheumatol.. 29. 931-937 (2002)
• [Publications] Yano T, Takasaki Y, Takeuchi K, et al.: "Anti-Ki antibodies recognize an epitope homologous with SV40 nuclear localization signal : clinical significance and reactivities in various immunoassays"Modern Rheumatol. 12. 50-55 (2002)