2001 Fiscal Year Annual Research Report

心筋細胞におけるミトコンドリア機能の調節機構:mPTPの作動様式と生理的意義

Research Project

Project/Area Number	13670703
Research Institution	Hamamatsu University School of Medicine
Principal Investigator	加藤秀樹浜松医科大学, 医学部, 助手 (80314029)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	林秀晴浜松医科大学, 医学部, 教授 (50135258) 寺田肇浜松医科大学, 医学部・附属病院, 講師 (50252177) 佐藤洋浜松医科大学, 医学部・附属病院, 助手 (30293632) 本荘晴朗名古屋大学, 環境医学研究所, 助教授 (70262912)
Keywords	ミトコンドリア / 共焦点レーザー顕微鏡 / calcein / permeability transition pore / saponin / cyclosporin A
Research Abstract	心筋細胞において、ミトコンドリア(Mito)のATP感受性K^+チャネル開口薬であるDiazoxideがMitoのpermeability transition pore(mPTP)を介してCa^<2+>を放出し、Ca^<2+> sparkとCa^<2+> transientを増大させることを報告してきた。平成13年度は、このmPTPの開口を、共焦点レーザー顕微鏡を用いて画像法により直接評価する方法を検討した。ラット単離心室筋細胞にcalcein/AM(20μM)を室温で20分間負荷した。同時にコバルト(5mM)をloading溶液に添加することで、細胞質に分布した色素は除去した。(1)電位依存性にMitoに選択的に集積するTMREと同時に染色すると、calceinのimageとTMREのimageは分布が完全に一致した。また、この同時染色を長時間行うと、色素間の相互作用によりcalceinの蛍光強度が減弱した。(2)calceinを負荷した後に、saponin(0.05mg/ml)を用いて細胞膜をpermeabilizeし、細胞質の色素を除去しても、蛍光強度の減少は10%以下であった。(3)Diazoxide(200μM)を10分間投与すると、calceineの蛍光強度は16%減少し、この効果はmPTPの選択的な阻害剤であるcyclosporin Aにより完全に抑制された。以上より、calceinとコバルトを同時に用いることにより、calceinがMitoへ選択的に負荷され、このcalcein蛍光の減少がmPTP開口の指標となりうることが示された。また。DiazoxideがmPTPを開口することが画像法を用いて確認された。

Research Products

(4 results)

All Other

All Publications (4 results)

[Publications] Mark T Ziolo et al.: "Expression of inducible nitric oxide synthase depresses beta-adrenergic-stimulated calcium release from the sarcoplasmic reticulum in intact ventricular myocytes"Circulation. 104. 2961-2966 (2001)
[Publications] Mark T Ziolo et al.: "Positive and negative effects of nitric oxide on Ca^<2+> sparks : influence of beta-adrenergic stimulation"Am J Physiology Heart Circ Physiol.. 281(6). H2295-H2303 (2001)
[Publications] Satoru Ito et al.: "Possible involvement of Rho kinase in Ca2+ sensitization and mobilization by MCh in tracheal smooth muscle"Am J Physiology Lung Cell Mol Physiol.. 280. L1281-L1224 (2001)
[Publications] 加藤秀樹他: "ミトコンドリアATP感受性K^+チャネル開口薬diazoxideがCa^<2+> transientに及ぼす効果の検討"心筋の構造と代謝. 23. 195-200 (2001)

2001 Fiscal Year Annual Research Report

心筋細胞におけるミトコンドリア機能の調節機構:mPTPの作動様式と生理的意義

Principal Investigator

加藤 秀樹 浜松医科大学, 医学部, 助手 (80314029)

Research Products

[Publications] Mark T Ziolo et al.: "Expression of inducible nitric oxide synthase depresses beta-adrenergic-stimulated calcium release from the sarcoplasmic reticulum in intact ventricular myocytes"Circulation. 104. 2961-2966 (2001)

[Publications] Mark T Ziolo et al.: "Positive and negative effects of nitric oxide on Ca^<2+> sparks : influence of beta-adrenergic stimulation"Am J Physiology Heart Circ Physiol.. 281(6). H2295-H2303 (2001)

[Publications] Satoru Ito et al.: "Possible involvement of Rho kinase in Ca2+ sensitization and mobilization by MCh in tracheal smooth muscle"Am J Physiology Lung Cell Mol Physiol.. 280. L1281-L1224 (2001)

[Publications] 加藤 秀樹 他: "ミトコンドリアATP感受性K^+チャネル開口薬diazoxideがCa^<2+> transientに及ぼす効果の検討"心筋の構造と代謝. 23. 195-200 (2001)

加藤秀樹浜松医科大学, 医学部, 助手 (80314029)

[Publications] 加藤秀樹他: "ミトコンドリアATP感受性K^+チャネル開口薬diazoxideがCa^<2+> transientに及ぼす効果の検討"心筋の構造と代謝. 23. 195-200 (2001)