2002 Fiscal Year Annual Research Report
巨核球胞体突起形成刺激時におけるシグナル伝達系の解析
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13671075
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| Research Institution | Iwate Medical University |
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Principal Investigator |
石田 陽治 岩手医科大学, 医学部, 助教授 (70151389)
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| Keywords | prplatelet formation / 血小板造血 / AT III / HDL / Protein Kinase C / Rho kinase |
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| Research Abstract |
1.PPF(Proplatelet formation)刺激因子に反応するヒト巨核芽球白血病細胞株(MEG)を用いたPPF刺激能の定量化:昨年度確立した血小板様粒子直接測定法やフローサイトメトリを用いた血小板様粒子測定法は正確に測定できるものの、時間や手間がかかるため、ATIII(+HDL)の刺激によってPPFを生じているMEG数を直接、倒立顕微鏡下で測定するアッセイ方法を確立した。MEGをマイクロウエロ内にまき、無血清下、ATIII、ATIII+HDL、ATIII+HDL+Thrombinを濃度を変えて加えた。12時間、24時間後にPPFを生じているMEG数を測定した。ATIIIのみでは、ほとんどPPFを生じているME比率は認められなかった。ATIII(100μg/ml)+HDLの添加で12時間後、HDL 0μg/ml1.3%、50μg/ml17.1%、100μg/ml47.3%、24時間後では、それぞれ1.1%、30.8%、46.5%、57.8%と濃度依存性に増加した。
2.シグナル伝達に関与するキナーゼならびにフォスファターゼ阻害剤を加え、上記の刺激因子による細胞株の反応性が阻害されるかどうかの検討
上記のアッセイ系(ATIII+HDL)に、シグナル伝達系の阻害剤を加え、PPF刺激能の阻害程度を観察した。同時に、トリパンブルーで生存率も測定した。PD98059(MAPK阻害剤)、LY294002(PI3K阻害剤)、SB203580(p38 MAPK阻害剤)、KT5720(Protein Kinase A阻害剤)、BIM(Protein Kinase C activator阻害剤)、Y27632(Rho kinase阻害剤)を100nMから100μMまで用いた。生存率は使用した阻害剤の濃度ではKT5720を除いて全て85%以上であった。LY294002、SB203580の100μM添加ではコントロールの141.1%、144.3%と有意に活性化されたが、BIM、Y27632添加では有意に濃度依存性(BIM:100nM 70.7%、500nM 66.9%、1μM 54.0%、10μM 4.5%、100μM 5.6%、Y27632:100nM 97.6%、1μM 88.5%、10μM 61.3%)に阻害された。
以上より、ATIII+HDLの刺激によって起こされる巨核球のPPFはProtein Kinase C(PKC)系とRho kinase系のシグナル伝達が大切な役割を担っていることが強く示唆された。
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Research Products
(5 results)
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[Publications] Shigeki Ito: "Flow cytometric analysis of aberrant expression of blasts using CD45 blast gating for minimal residual disease in acute leukemia and high-risk myelodysplastic syndrome"Leukemia Research. 25. 205-211 (2001)
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[Publications] Kiyokuni Ogata: "Reappraisal of the clinical significance of CD7 expression in association with cytogenetics in de novo acute myeloid leukemia"British Journal Haematology. 115. 945-948 (2002)
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[Publications] Shigeki Ito: "Clonal evolution of blasts in an elderly patient with CD56+ relapsed acute promyelocytic leukemia"American Journal of Hematology. 69. 59-63 (2002)
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[Publications] Shie Ohgi: "Spontaneous regression of malignant lymphoma of the lumbar spine"Skeletal Radiol. 31. 99-102 (2002)
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[Publications] 石田 陽治: "EBM血液疾患の治療"押味和夫, 別所正美, 岡本真一郎, 加藤淳. 739 (2002)
